細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境，使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。在利用細(xì)胞培養(yǎng)瓶進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)遇到各種各樣的問題，細(xì)胞抱團(tuán)就是比較常見的一類，如果細(xì)胞培養(yǎng)前期多加注意，這種情況是可以避免的。下面對(duì)細(xì)胞成團(tuán)詳細(xì)分析中：
一、細(xì)胞成團(tuán)的原因：
1、消化的過程過于粗暴，吹打太用力，消化過久，消化液太強(qiáng)或有毒性等會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。細(xì)胞死亡后會(huì)釋放出DNA，纏繞其他細(xì)胞，形成黏性的細(xì)胞團(tuán)。
2、細(xì)胞離心速度過大或時(shí)間太長(zhǎng)，也容易造成細(xì)胞抱團(tuán)。
3、消化不完全的時(shí)候，細(xì)胞和細(xì)胞之間的連接沒有分開；消化過度的時(shí)候，圓形的細(xì)胞容易聚堆，再分開很困難。
4、狀態(tài)不好、老化的細(xì)胞，也可能會(huì)出現(xiàn)抱團(tuán)生長(zhǎng)的情況（比如換液不及時(shí)、長(zhǎng)得太滿才傳代、污染等造成的細(xì)胞狀態(tài)差）。
5、傳代時(shí)沒有吹打均勻，細(xì)胞團(tuán)多，培養(yǎng)時(shí)就會(huì)是一團(tuán)一團(tuán)的。
6、非震蕩培養(yǎng)或細(xì)菌（胞）量過多的話就會(huì)成團(tuán)。
二、如何避免細(xì)胞成團(tuán)的現(xiàn)象？
首先確認(rèn)當(dāng)前細(xì)胞生長(zhǎng)密度及狀態(tài)，80%左右的生長(zhǎng)密度即可進(jìn)行傳代，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較好，且用于傳代的數(shù)量也足夠。傳代操作前，使用緩沖液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)且全面地潤(rùn)洗，清除死亡的細(xì)胞團(tuán)和部分堆疊雜質(zhì)(在選擇適當(dāng)胰酶濃度時(shí)，對(duì)于不同代數(shù)的不同細(xì)胞系需進(jìn)行一定的調(diào)整，如：部分貼壁牢固的細(xì)胞應(yīng)將胰酶分裝后，進(jìn)行預(yù)熱處理;細(xì)胞密度過高時(shí)，應(yīng)該向胰酶中加入少量緩沖液，緩慢均勻地消化細(xì)胞等。對(duì)于貼壁格外牢固的細(xì)胞，可以嘗試多次分批進(jìn)行消化，最大限度保證細(xì)胞狀態(tài))。
在消化過程中，需均勻慢速晃動(dòng)培養(yǎng)器皿，以免局部胰酶濃度過高而影響傳代。切勿用力搖動(dòng)，導(dǎo)致邊緣松動(dòng)的大片細(xì)胞直接脫落，從而增加細(xì)胞成團(tuán)幾率。培養(yǎng)器皿的選擇也需注意，部分實(shí)驗(yàn)室會(huì)使用玻璃培養(yǎng)瓶，因細(xì)胞貼壁在玻璃底更容易分離。同時(shí)玻璃材質(zhì)的親水性和塑料有區(qū)別，而且玻璃細(xì)胞培養(yǎng)瓶都是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部處理，可能會(huì)有清潔殘留，在一定程度上抑制細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)，并且更容易消化，細(xì)胞之間的連接比貼壁還要緊密，聚團(tuán)幾率很大。另外，避免傳代過程中匯合度較大，本身1:3甚至1:4都可以正常培養(yǎng)的細(xì)胞被1:2傳代，會(huì)導(dǎo)致母代細(xì)胞濃度過高，在分化過程中出現(xiàn)堆疊現(xiàn)象適當(dāng)?shù)奶幚砗驮O(shè)備使用，也可以減少成團(tuán)。如果使用離心機(jī)分離或混合樣品，將其設(shè)置為正確的速度可以減少聚團(tuán)，通常情況下，較快的速度可以離心散細(xì)胞，但在高速下也必須考慮細(xì)胞的脆弱性。
三、細(xì)胞成團(tuán)如何處理？
1、如果細(xì)胞抱團(tuán)不影響生長(zhǎng)就沒問題，只是計(jì)數(shù)時(shí)較麻煩。在消化時(shí)，可在細(xì)胞由多角形變成圓型之前，用手輕磕培養(yǎng)瓶的側(cè)壁，使細(xì)胞從壁上脫落（最好不要吹打，對(duì)細(xì)胞形狀和生長(zhǎng)都不好）。
2、如果感覺有死細(xì)胞的DNA，在細(xì)胞懸液中加入幾滴無菌的DNAse()（1mg/ml溶于水）將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細(xì)胞，防止對(duì)細(xì)胞膜造成物理損傷。
3、如果細(xì)胞抱團(tuán)是肉眼可見的，可讓細(xì)胞靜置半分鐘左右，然后吸取上半部分沒有抱團(tuán)的細(xì)胞懸液來傳代。如果細(xì)胞抱團(tuán)肉眼不可見，目前還沒有特別好的分離方法，只能等細(xì)胞狀態(tài)改善后將這部分細(xì)胞慢慢排除出去。
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