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目前主流的實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR）方法分為染料法和探針?lè)?/span>，染料法以SYBRGreen法為代表，SYBRGreen染料游離時(shí)熒光微弱，但但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強(qiáng)，反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度與反應(yīng)管中雙鏈DNA的數(shù)量成正比例關(guān)系，因此熒光定量pcr實(shí)驗(yàn)步驟可以通過(guò)檢測(cè)熒光計(jì)算反應(yīng)管中產(chǎn)生的雙鏈DNA（PCR產(chǎn)物）的量，但該方法沒(méi)有特異性，非特異性擴(kuò)增的產(chǎn)物也會(huì)被計(jì)入。

   閾值循環(huán)數(shù) Threshold cycle (Ct) 也寫(xiě)作Cq值，熒光信號(hào)大于熒光閾值時(shí)PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個(gè)循環(huán)的熒光值設(shè)為基線（baseline），是由于測(cè)量的偶然誤差引起的。閾值（threshold）一般是基線的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。在實(shí)際操作中也可以手動(dòng)調(diào)節(jié)。高于閾值的熒光信號(hào)被認(rèn)為是真實(shí)的信號(hào)，用于定義Ct值。Ct會(huì)受到閾值的影響，每次試驗(yàn)由于樣品和儀器的不同會(huì)導(dǎo)致基線不同，進(jìn)而影響閾值和Ct值。

   血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體，是血漿去除纖維蛋白后的混合物，主要成分包括蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、維生素和多肽（如生長(zhǎng)因子、胰島 素、促生長(zhǎng)激素）等。血清是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中重要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)也對(duì)細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過(guò)反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay， ELISA)在生物實(shí)驗(yàn)技術(shù)中，ELISA是一種非常常見(jiàn)的分析方法。其原理是抗原或抗體的固相化及抗原抗體的酶標(biāo)記。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。該實(shí)驗(yàn)因其靈敏度較高，特異性較好，操作較簡(jiǎn)單，可大批量操作而廣泛應(yīng)用于多種傳染性疾病的篩查工作中。而在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，有時(shí)會(huì)遇到一種被稱為“花板”的現(xiàn)象。

   “花板”現(xiàn)象，顧名思義，是指在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，酶標(biāo)板上的反應(yīng)孔出現(xiàn)了不均勻的顏色分布，使得孔內(nèi)的顏色看起來(lái)像是“花”一樣。所謂“花板”，就是空白、陰性、陽(yáng)性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻偏高，弱陽(yáng)性結(jié)果較多。這一現(xiàn)象的出現(xiàn)，影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，往往是由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的某些操作不當(dāng)或試劑的問(wèn)題所導(dǎo)致的。對(duì)“花板”現(xiàn)象進(jìn)行了分析和總結(jié)，認(rèn)為花板原因大多在樣品，解決辦法主要在洗滌，孵育和顯色過(guò)程也會(huì)導(dǎo)致。