酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年首次描述。該測(cè)定依賴于抗原-抗體相互作用的原理，并利用酶和比色檢測(cè)來(lái)量化目標(biāo)分子，主要用于檢測(cè)和量化生物樣品中特定蛋白質(zhì)、肽、抗體或抗原的存在。ELISA測(cè)定通常應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，包括臨床診斷、藥物研究和生命科學(xué)基礎(chǔ)研究。
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ELISA檢測(cè)中對(duì)照的選擇對(duì)于確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性至關(guān)重要。以下是ELISA檢測(cè)中常用的對(duì)照類型及其作用：
空白對(duì)照（Blank Control）：
目的：提供背景信號(hào)參考，確保讀取值表示樣品中的分析物濃度。
定義：空白對(duì)照是一種常見(jiàn)的陰性對(duì)照類型，用于檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的“本底”高不高。它不含有任何液體或未見(jiàn)液體的空孔，或僅包含檢測(cè)緩沖液。
作用：幫助分析塑料和緩沖液的背景吸光度對(duì)信號(hào)的貢獻(xiàn)，通常用于校正背景吸收的變化。
陰性對(duì)照（Negative Control）：
目的：驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果中沒(méi)有假陽(yáng)性，并檢測(cè)非特異性結(jié)合和假陽(yáng)性結(jié)果。
定義：陰性對(duì)照是指不含目標(biāo)蛋白的樣品，如已知不表達(dá)目標(biāo)蛋白的樣本。
作用：通過(guò)與陽(yáng)性對(duì)照對(duì)比，確認(rèn)實(shí)驗(yàn)過(guò)程無(wú)誤且有效，確保陰性結(jié)果的真實(shí)性。
陽(yáng)性對(duì)照（Positive Control）：
目的：確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程有效，驗(yàn)證試劑盒和實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性。
定義：陽(yáng)性對(duì)照是已知含有目標(biāo)蛋白的內(nèi)源性可溶樣品，或已知含有檢測(cè)抗體免疫原的純化蛋白或多肽。
作用：當(dāng)樣品檢測(cè)結(jié)果為陰性時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照的陽(yáng)性結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)過(guò)程正確，實(shí)驗(yàn)的陰性結(jié)果是真實(shí)的。
樣本基質(zhì)中的標(biāo)準(zhǔn)品（Sample Matrix Standard）：
目的：評(píng)估特定樣品基質(zhì)中分析物的檢測(cè)性能。
定義：在ELISA中，標(biāo)準(zhǔn)品通常用正常稀釋緩沖液稀釋，但也可以使用檢測(cè)的種屬血清來(lái)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，以模擬實(shí)際樣品基質(zhì)。
作用：提供關(guān)于某種特殊樣品基質(zhì)中分析物發(fā)現(xiàn)程度的信息，確保檢測(cè)性能。
標(biāo)準(zhǔn)品（Standard Curve）：
目的：用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便定量分析樣品中的目標(biāo)蛋白濃度。
定義：標(biāo)準(zhǔn)品是含有已知濃度的目標(biāo)蛋白的樣品，用于創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
作用：通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)結(jié)果，可以計(jì)算出樣品中的目標(biāo)蛋白濃度。
S0陰性對(duì)照（S0 Negative Control）：
目的：確定在沒(méi)有分析物的情況下最大的背景信號(hào)。
定義：不含標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，但添加了成功著色反應(yīng)所需的所有其他成分。
作用：通過(guò)這種對(duì)照可以控制高非特異性背景的來(lái)源，并消除方法，如洗滌步驟、抗體稀釋等。
非特異性結(jié)合（NSB）對(duì)照：
目的：確定由于共軛酶的非特異性結(jié)合而產(chǎn)生的背景。
定義：在沒(méi)有捕獲抗體和樣品或標(biāo)準(zhǔn)分析物的情況下分析非特異性結(jié)合。
作用：獲得的非特異性本底通常用于計(jì)算所有其他對(duì)照、樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的非特異性本底校正值。
以上這些對(duì)照的使用有助于確保ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性，通過(guò)對(duì)比不同對(duì)照的結(jié)果，可以有效排除實(shí)驗(yàn)誤差，提高檢測(cè)結(jié)果的可信度。
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