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2XRAPA3G全能PCR Mix
A-PJ1031
貨號(hào) 純度 規(guī)格 目錄價(jià) 會(huì)員價(jià) 庫(kù)存 數(shù)量 購(gòu)買
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產(chǎn)品詳情
RAPA3G DNA聚合酶為經(jīng)電子重構(gòu)架的第三代Taq DNA聚合酶，第三代DNA聚合酶具有高度的雜質(zhì)耐受性、長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力、高擴(kuò)增成功率、高產(chǎn)量等特征，從而使得RAPA3G系列產(chǎn)品可用于粗制樣品的直接擴(kuò)增，無(wú)需核酸純化步驟。雜質(zhì)耐受性方面，該酶可耐受植物中的多糖多酚；全血、血清、血漿中的肝素、高濃度的血紅蛋白、甘油三脂；乙醇；胍鹽；SDS等強(qiáng)PCR抑制劑。在血液直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)中，RAPA3G PCR Mix性能與KAPA3G DNA聚合酶展現(xiàn)出同等的表現(xiàn)，其性能表現(xiàn)優(yōu)于二代聚合酶（血液擴(kuò)增Hemo KlenTaq Mix）。在植物直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)中，RAPA3G PCR Mix在配合DNA釋放劑的條件下與KAPA3G Plant PCR試劑盒性能一致。
長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力方面，使用該酶可輕松擴(kuò)增8kb的基因組片段，20kb的λ DNA，8kb的cDNA。該酶具有6kb/min以上的擴(kuò)增速度，可顯著的縮短PCR的擴(kuò)增時(shí)間，在常規(guī)測(cè)試條件下，10s的延伸時(shí)間可完成1kb的基因組DNA擴(kuò)增。在PCR擴(kuò)增成功率方面，與其它類型的PCR擴(kuò)增試劑對(duì)比中，RAPA3G PCR Mix表現(xiàn)出卓越的PCR擴(kuò)增成功率。此外，該酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶，因此其具有一定的保真性能（經(jīng)藍(lán)白斑測(cè)試，其保真性能約為Taq DNA聚合酶的56倍）。另外，RAPA3G系列產(chǎn)品均采用專有的熱啟動(dòng)技術(shù)，確保50°C以下完全無(wú)活性，僅有95°C加熱5min以后才能恢復(fù)其活性，因此可最大限度的提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。該P(yáng)CR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性，產(chǎn)物部分帶有"A"尾巴，部分為平末端，因此產(chǎn)物均可用于TA克隆或平端克隆。

特征和用途
  • 快速擴(kuò)增：具有6kb/min的擴(kuò)增能力，1kb片段可在25min內(nèi)完成擴(kuò)增.
  • 高成功率擴(kuò)增：RAPA3G PCR Mix具有最高的PCR擴(kuò)增成功率。
  • 液體樣品直接擴(kuò)增：全血、血清、培養(yǎng)細(xì)胞、尿液等樣本直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增，無(wú)需核酸純化。
  • 組織樣本直接擴(kuò)增：葉片、種子、果實(shí)、動(dòng)物組織等樣品，可以直接擴(kuò)增，也可采用DNA釋放劑簡(jiǎn)單處理后直接擴(kuò)增，無(wú)需核酸純化。
  • 長(zhǎng)片段擴(kuò)增：質(zhì)粒、λ DNA 等簡(jiǎn)單模板可以有效擴(kuò)增>20 kb，基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb，cDNA可以有效擴(kuò)增>8kb。
  • 高保真擴(kuò)增：保真度是 Taq DNA Polymerase 的56 倍。
  • 高特異性：采用專有熱啟動(dòng)技術(shù)，50°C以下無(wú)活性，僅有95°C加熱5min才能恢復(fù)酶活。

RAPA3G DNA聚合酶對(duì)抑制物耐受性
SDS 0.01% 胍鹽 0.25%
乙醇 5% 全血 15%
肝素 0.1IU/ml 血清 15%
Trizol 0.5% 血漿 2%
血紅蛋白 30μM 尿液 5%

50μl體積建議添加的樣品量
抗凝全血 2.5 μl 培養(yǎng)細(xì)胞 >100個(gè)
血清 2.5 μl 組織 0.1mg
尿液 2.5 μl 毛發(fā)囊 1-3個(gè)
血漿 1 μl gDNA

1-400ng
植物葉片 2mm cDNA 1-400ng
植物粗提物 2-4 μl 質(zhì)粒 0.1-10ng

儲(chǔ)存
長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20°C以下，可保存2年，避免反復(fù)凍融；短期使用置于4°C（3個(gè)月）保存，一經(jīng)融化后請(qǐng)放置于4°C，勿再凍存。

反應(yīng)實(shí)例
1. 模板適應(yīng)性強(qiáng)，長(zhǎng)片段和短片段都可有效擴(kuò)增
Lane 1：λDNA 500bp, 2：λDNA 1kb, 3：λDNA 2kb, 4：λDNA 5kb, 5：λDNA 8kb, 6：λDNA 15kb, 7：λDNA 20kb, 8：human 500bp ,9：human 1kb, 10：human 2kb ,11：human 5kb, 12：human 8kb, 13：cDNA 166bp, 14：cDNA 552bp, 15：cDNA 960bp, 16：cDNA 1574bp, 17：cDNA 1705bp, 18：cDNA 2755b,p 19：cDNA 4128bp, 20：cDNA 7600bp, M：DNA Marker 10000
選取三種DNA模板，使用RAPA3G PCR Mix進(jìn)行擴(kuò)增，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles，結(jié)果如上圖所示，對(duì)于不同種類DNA模板和不同長(zhǎng)度的靶基因，RAPA3G PCR Mix均有良好的擴(kuò)增性能。
2. 對(duì)于粗制樣品DNA具有極強(qiáng)的耐受性
分別以人全血、血清、葉片粗制品DNA以及大豆種子粗制品DNA為模板，使用RAPA3G PCR Mix進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果如上圖展示，各種粗制樣品都有良好的擴(kuò)增，其中全血和血清可耐受15%。
3.擴(kuò)增靈敏度高，λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴(kuò)增
以λDNA為模板，選取不同模板使用量，采用RAPA3G PCR Mix進(jìn)行擴(kuò)增2kb靶基因，循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles，結(jié)果如上圖所示，λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴(kuò)增
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