RAPA3G DNA聚合酶為經(jīng)電子重構(gòu)架的第三代Taq DNA聚合酶,第三代DNA聚合酶具有高度的雜質(zhì)耐受性、長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力、高擴(kuò)增成功率、高產(chǎn)量等特征,從而使得RAPA3G系列產(chǎn)品可用于粗制樣品的直接擴(kuò)增,無(wú)需核酸純化步驟。雜質(zhì)耐受性方面,該酶可耐受植物中的多糖多酚;全血、血清、血漿中的肝素、高濃度的血紅蛋白、甘油三脂;乙醇;胍鹽;SDS等強(qiáng)PCR抑制劑。在血液直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)中,RAPA3G PCR Mix性能與KAPA3G DNA聚合酶展現(xiàn)出同等的表現(xiàn),其性能表現(xiàn)優(yōu)于二代聚合酶(血液擴(kuò)增Hemo KlenTaq Mix)。在植物直擴(kuò)PCR實(shí)驗(yàn)中,RAPA3G PCR Mix在配合DNA釋放劑的條件下與KAPA3G Plant PCR試劑盒性能一致。
長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力方面,使用該酶可輕松擴(kuò)增8kb的基因組片段,20kb的λ DNA,8kb的cDNA。該酶具有6kb/min以上的擴(kuò)增速度,可顯著的縮短PCR的擴(kuò)增時(shí)間,在常規(guī)測(cè)試條件下,10s的延伸時(shí)間可完成1kb的基因組DNA擴(kuò)增。在PCR擴(kuò)增成功率方面,與其它類型的PCR擴(kuò)增試劑對(duì)比中,RAPA3G PCR Mix表現(xiàn)出卓越的PCR擴(kuò)增成功率。此外,該酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶,因此其具有一定的保真性能(經(jīng)藍(lán)白斑測(cè)試,其保真性能約為T(mén)aq DNA聚合酶的56倍)。另外,RAPA3G系列產(chǎn)品均采用專有的熱啟動(dòng)技術(shù),確保50°C以下完全無(wú)活性,僅有95°C加熱5min以后才能恢復(fù)其活性,因此可最大限度的提高擴(kuò)增的特異性,減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。該P(yáng)CR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性,產(chǎn)物部分帶有"A"尾巴,部分為平末端,因此產(chǎn)物均可用于TA克隆或平端克隆。 |
特征和用途
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- 快速擴(kuò)增:具有6kb/min的擴(kuò)增能力,1kb片段可在25min內(nèi)完成擴(kuò)增.
- 高成功率擴(kuò)增:RAPA3G PCR Mix具有最高的PCR擴(kuò)增成功率。
- 液體樣品直接擴(kuò)增:全血、血清、培養(yǎng)細(xì)胞、尿液等樣本直接進(jìn)行PCR擴(kuò)增,無(wú)需核酸純化。
- 組織樣本直接擴(kuò)增:葉片、種子、果實(shí)、動(dòng)物組織等樣品,可以直接擴(kuò)增,也可采用DNA釋放劑簡(jiǎn)單處理后直接擴(kuò)增,無(wú)需核酸純化。
- 長(zhǎng)片段擴(kuò)增:質(zhì)粒、λ DNA 等簡(jiǎn)單模板可以有效擴(kuò)增>20 kb,基因組可以有效擴(kuò)增>8 kb,cDNA可以有效擴(kuò)增>8kb。
- 高保真擴(kuò)增:保真度是 Taq DNA Polymerase 的56 倍。
- 高特異性:采用專有熱啟動(dòng)技術(shù),50°C以下無(wú)活性,僅有95°C加熱5min才能恢復(fù)酶活。
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RAPA3G DNA聚合酶對(duì)抑制物耐受性
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SDS |
0.01% |
胍鹽 |
0.25% |
乙醇 |
5% |
全血 |
15% |
肝素 |
0.1IU/ml |
血清 |
15% |
Trizol |
0.5% |
血漿 |
2% |
血紅蛋白 |
30μM |
尿液 |
5% |
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50μl體積建議添加的樣品量
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抗凝全血 |
2.5 μl |
培養(yǎng)細(xì)胞 |
>100個(gè) |
血清 |
2.5 μl |
組織 |
0.1mg |
尿液 |
2.5 μl |
毛發(fā)囊 |
1-3個(gè) |
血漿 |
1 μl |
gDNA |
1-400ng
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植物葉片 |
2mm |
cDNA |
1-400ng |
植物粗提物 |
2-4 μl |
質(zhì)粒 |
0.1-10ng |
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儲(chǔ)存
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長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20°C以下,可保存2年,避免反復(fù)凍融;短期使用置于4°C(3個(gè)月)保存,一經(jīng)融化后請(qǐng)放置于4°C,勿再凍存。 |
反應(yīng)實(shí)例
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1. 模板適應(yīng)性強(qiáng),長(zhǎng)片段和短片段都可有效擴(kuò)增 |
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Lane 1:λDNA 500bp, 2:λDNA 1kb, 3:λDNA 2kb, 4:λDNA 5kb, 5:λDNA 8kb, 6:λDNA 15kb, 7:λDNA 20kb, 8:human 500bp ,9:human 1kb, 10:human 2kb ,11:human 5kb, 12:human 8kb, 13:cDNA 166bp, 14:cDNA 552bp, 15:cDNA 960bp, 16:cDNA 1574bp, 17:cDNA 1705bp, 18:cDNA 2755b,p 19:cDNA 4128bp, 20:cDNA 7600bp, M:DNA Marker 10000 |
選取三種DNA模板,使用RAPA3G PCR Mix進(jìn)行擴(kuò)增,循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles,結(jié)果如上圖所示,對(duì)于不同種類DNA模板和不同長(zhǎng)度的靶基因,RAPA3G PCR Mix均有良好的擴(kuò)增性能。 |
2. 對(duì)于粗制樣品DNA具有極強(qiáng)的耐受性 |
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分別以人全血、血清、葉片粗制品DNA以及大豆種子粗制品DNA為模板,使用RAPA3G PCR Mix進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果如上圖展示,各種粗制樣品都有良好的擴(kuò)增,其中全血和血清可耐受15%。 |
3.擴(kuò)增靈敏度高,λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴(kuò)增 |
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以λDNA為模板,選取不同模板使用量,采用RAPA3G PCR Mix進(jìn)行擴(kuò)增2kb靶基因,循環(huán)數(shù)統(tǒng)一為28 cycles,結(jié)果如上圖所示,λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴(kuò)增 |