酸性磷酸酶（ACP）活性測定試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸，常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于前列腺癌的輔助診斷。
測定原理：
在酸性環(huán)境中，ACP催化對硝基苯磷酸二鈉水解生成4-硝基苯酚，在405nm有特征光吸收；通過測定405nm吸光度增加速率，來計算ACP活性。
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、96孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體60 mL×2瓶，4℃保存。
試劑二：液體50 mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體50 mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
測定：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到405 nm。
2. 在 EP 管中加入下列試劑
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試劑名稱（μL） |
測定管 |
對照管 |
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樣本 |
10 |
10 |
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試劑一 |
90 |
990 |
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試劑二 |
900 |
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30℃避光保溫30 min |
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試劑三 |
400 |
400 |
混勻，吸取 200μL 加入96 孔板中，405 nm 下測定各管吸光值。ΔA=A測定管-A對照管。
注意：每個測定管需做一個對照管。
ACP活性計算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線 y = 7.3336x + 0.0179；R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。
1. 血液中ACP活性計算
活性單位定義：30℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 4-硝基苯酚定義為1個酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mL)=（ΔA-0.0179）÷7.3336 ×V反總÷T÷V樣
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：30℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 μmol 4-硝基苯酚定義為1個酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(V樣×Cpr)
=0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：30℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯酚定義為1個酶活單位。
ACP活力 (μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷(W×V 樣÷V 樣總)
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷W
（3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：30℃中每104個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 μ mol 4-硝基苯酚定義為1個酶活單位。
ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V反總÷T÷（細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷細(xì)胞數(shù)量
V反總：反應(yīng)體系總體積（mL），1 mL； W ：樣品質(zhì)量，g； V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積（mL），0.01 mL；V樣總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間（min），30 min；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。
注意事項：
ACP不穩(wěn)定，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當(dāng)天準(zhǔn)備；血清樣品中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
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資料/datasheet
