考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測(cè)定原理：
在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物；該復(fù)合物在620nm處有最大吸收峰， 其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質(zhì)分析。
自備儀器和用品：
離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體11 mL×1瓶，4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：
冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測(cè)液。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋）
測(cè)定操作：
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試劑（μL） |
測(cè)定管 |
空白管 |
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樣本 |
100 |
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蒸餾水 |
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100 |
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試劑一 |
100 |
100 |
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混勻后，測(cè)定波長(zhǎng)620 nm吸光值，△A=A測(cè)定-A空白。 |
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注意：空白管只需要測(cè)定一次。
計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 7.1265x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL)
y: 吸光值差值
1.按液體樣本體積計(jì)算：
Cpr（mg/mL）=(△A+0.0007)÷7.1265
=0.1403×(△A+0.0007)
2.按組織樣本質(zhì)量計(jì)算：
Cpr（mg/g）=(△A+0.0007)÷7.1265×V總÷W
=0.1403×(△A+0.0007)÷W
V總：提取液體積，1 mL; W：樣本質(zhì)量，g。
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