| 貨號(hào) | 純度 | 規(guī)格 | 目錄價(jià) | 會(huì)員價(jià) | 庫(kù)存 | 數(shù)量 | 購(gòu)買 |
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| AP3402-48T | 48T | ￥3490.00 | 登錄查看 |
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【檢測(cè)原理】
本試劑盒根據(jù)熒光 PCR 技術(shù)原理，針對(duì) PCR試劑盒設(shè)計(jì)特異性引物和 Taqman 探針，通過(guò)熒光 PCR 檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì) PCR試劑盒的檢 測(cè)。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1．避光-20℃儲(chǔ)存，有效期 12 個(gè)月。
2．低溫運(yùn)輸不能超過(guò) 4 天；開封后避光-20℃儲(chǔ)存，對(duì)有效期沒(méi)有影響。避免反復(fù)凍融，凍融 6 次不影響檢測(cè)效果。
3．生產(chǎn)日期、有效期至：見外包裝盒。
【適用儀器】
適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動(dòng)熒光PCR 檢測(cè)儀。
【樣本要求】
1．樣本種類：鼻/咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液；培養(yǎng)物等樣品。
2．保存條件：采集的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)送檢，24 小時(shí)內(nèi)檢測(cè)的應(yīng) 4℃保存，超過(guò) 24 小時(shí)的最好-70℃保存，并避免反復(fù)凍融。
【檢測(cè)方法】
1 ． 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
將試劑盒各組分置 4℃避光融化，充分混勻后瞬間離心。計(jì)算試劑使用份數(shù) N（N=樣本數(shù)+1 管陽(yáng)性對(duì)照+1 管陰性對(duì)照），根據(jù)下表配置反應(yīng)體系mix，加入一適當(dāng)體積離心管中，充分混勻后瞬間離心，按 20μL 分裝至 PCR 反應(yīng)管/板，并轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
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組分 |
體積（μL ） |
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qPCR 預(yù)混液（含酶） |
16 |
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引物探針 |
4 |
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總體積（反應(yīng)體系 mix ） |
20 |
2 ． 樣本處理（樣本處理區(qū)）
① 核酸提取
選擇合適的核酸提取試劑盒提取核酸，具體按照相應(yīng)的試劑盒說(shuō)明書操作。
② 加樣
在已加入反應(yīng)體系 mix 的 PCR 反應(yīng)管/板上分別加入處理好的待檢標(biāo)本核酸、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各 5μL，終體積為 25μL。
蓋緊管蓋或封膜，瞬間低速離心后置熒光 PCR 檢測(cè)儀擴(kuò)增。
3 ． 擴(kuò)增檢測(cè)（核酸擴(kuò)增區(qū)）
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步驟 |
溫度 |
時(shí)間 |
循環(huán)數(shù) |
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①預(yù)變性 |
95℃ |
5min |
1cycle |
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②變性 退火/延伸/檢測(cè)熒光* |
95℃ 55℃ |
10s 40s |
40cycles |
*步驟②中 55℃時(shí)熒光檢測(cè)，檢測(cè)通道為 FAM。*ABI 系列熒光 PCR 儀不選 ROX 校正，淬滅基團(tuán)選 None。
4 ． 結(jié)果分析根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)起止值，（建議起始設(shè)在 3～15、終止設(shè)在 5～20，同時(shí)調(diào)整陰性對(duì)照的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線），點(diǎn)擊分析，在報(bào)告界面查看結(jié)果。
【質(zhì)量控制】
1．陰性對(duì)照：Ct 值＞38 或未檢出。
2．陽(yáng)性對(duì)照：擴(kuò)增曲線呈 S 型，且 Ct 值≤30。
3．同一實(shí)驗(yàn)以上要求需同時(shí)滿足，否則本次實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
4．每種檢測(cè)靶標(biāo)都需設(shè)陰陽(yáng)對(duì)照，不同的靶標(biāo)根據(jù)對(duì)應(yīng)陰性調(diào)整基線閾值。
【結(jié)果判讀】
1．FAM 通道檢測(cè) B 組鏈球菌。
2．陰性：Ct 值＞38 或未檢出。
3．陽(yáng)性：擴(kuò)增曲線呈 S 型，且 Ct 值≤35。
4．可疑：擴(kuò)增曲線呈 S 型，且 35＜Ct 值≤38，需復(fù)檢；復(fù)檢結(jié)果若一致，判定結(jié)果為陽(yáng)性。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1．樣品采集、運(yùn)輸、保存不當(dāng)，試劑運(yùn)輸、保存、配置不當(dāng)都可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至?xí)?dǎo)致假陰性結(jié)果。
2．如果實(shí)驗(yàn)室污染、試劑污染、樣品交叉污染，可能出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
【注意事項(xiàng)】
1．PCR 操作各階段應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作，避免交叉污染。
2．試劑盒各組分使用前應(yīng)充分融化混勻，離心數(shù)秒后使用。
3．各組分不得與其他產(chǎn)品或不同批號(hào)的相應(yīng)成分進(jìn)行互換。
4．待測(cè)標(biāo)本若不及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)保存于-20℃或-70℃。
5．樣品的處理應(yīng)該嚴(yán)格按照生物安全規(guī)范操作。
6．PCR 操作人員應(yīng)具有經(jīng)驗(yàn)和受過(guò)專業(yè)培訓(xùn)。
7．本試劑盒僅用于科研使用，不做為臨床診斷使用。
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資料/datasheet
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