| 貨號(hào) | 純度 | 規(guī)格 | 目錄價(jià) | 會(huì)員價(jià) | 庫存 | 數(shù)量 | 購買 |
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| AP128218-50T | 50T | 50T | ￥3490.00 | 登錄查看 |
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【產(chǎn)品名稱】 甲型流感H1N1亞型病毒核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【產(chǎn)品編號(hào)】AP128218
【包裝規(guī)格】 50人份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于對人咽拭子樣本中甲型流感H1N1亞型病毒核酸進(jìn)行定性檢測。檢測結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)。
流感病毒屬于正黏病毒科的流感病毒屬，依據(jù)內(nèi)部核蛋白與基質(zhì)蛋白的抗原性差異，可被分為甲、乙、丙三型（即A、B、C 三型）。據(jù)病毒顆粒外膜血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）蛋白抗原性的不同，甲型流感病毒可分為16 個(gè)H 亞型（H1~H16）和9 個(gè)N 亞型（N1~N9）。其中甲型H1N1流行性感冒（流感）是由一種新的流感病毒引起的急性呼吸道傳染病， 臨床主要表現(xiàn)為流感樣癥狀， 包括發(fā)熱、流涕、咽痛、咳嗽、頭痛和腹瀉等。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒選用甲型流感H1N1亞型病毒保守基因片段設(shè)計(jì)特異引物及特異探針，該探針能與引物擴(kuò)增區(qū)域中間的一段DNA模板發(fā)生特異性結(jié)合，在PCR延伸反應(yīng)過程中，Taq酶的外切酶活性將5’端熒光基團(tuán)從探針上切割下來，使之游離于反應(yīng)體系中，從而脫離了3’端熒光淬滅基團(tuán)的屏蔽，即能接受光刺激而發(fā)出可供儀器檢測的熒光，從而實(shí)現(xiàn)在全封閉反應(yīng)體系中對甲型流感H1N1亞型病毒核酸的自動(dòng)化檢測。
試劑盒中的內(nèi)標(biāo)選用一對管家基因特異性引物，結(jié)合特異性探針，該探針能與引物擴(kuò)增區(qū)域中間的一段DNA模板發(fā)生特異性結(jié)合，內(nèi)標(biāo)選用CY5通道，從而實(shí)現(xiàn)在全封閉反應(yīng)體系中對檢測過程的監(jiān)控，可有效監(jiān)控假陰性的發(fā)生。
【主要組成成份】
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組成 |
規(guī)格(50測試/盒) |
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H1N1 反應(yīng)混合液 H1N1陽性對照 陰性對照 |
750μl×1 80μl ×1 80μl ×1 |
注: 不同批號(hào)試劑盒中各組份不可以互換
【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑-20℃±5℃條件下，有效期為12 個(gè)月。
未使用完的試劑繼續(xù)冷凍保存，不影響其穩(wěn)定性，試劑反復(fù)凍融三次后在-20℃±5℃條件下可保存30 天；試劑開瓶后，在室溫條件下放置不超過8 小時(shí)；本產(chǎn)品應(yīng)以冰盒或者冷藏車進(jìn)行運(yùn)輸，模擬運(yùn)輸實(shí)驗(yàn)表明運(yùn)輸條件不會(huì)影響產(chǎn)品的穩(wěn)定性和有效期，但運(yùn)輸時(shí)間不應(yīng)超過7 天。
【適用儀器】
適用于具有FAM、HEX/VIC 、CY5通道的實(shí)時(shí)熒光PCR儀，如ABI系列實(shí)時(shí)熒光PCR系統(tǒng)。
【樣本要求】
1. 標(biāo)本：人咽拭子樣本。
2. 采集容器：應(yīng)當(dāng)選用國家批準(zhǔn)生產(chǎn)的一次性使用的人咽拭子采樣器。
3. 采集：樣本采集具體方法請參考《微生物標(biāo)本采集手冊》一書。
4. 存放：2-8℃保存，不超過24小時(shí)；-20℃以下保存，不超過3個(gè)月；-70℃以下長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
5. 運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰袋密封進(jìn)行運(yùn)輸。
【檢驗(yàn)方法】
1. 甲型流感H1N1亞型病毒RNA檢測試劑盒可兼容常規(guī)RNA提取試劑盒或常規(guī)RNA提取方法從待測樣本中制備的合格的RNA。制備的RNA可直接作為RNA樣品，加入PCR反應(yīng)體系中。
2. 試劑配制【試劑準(zhǔn)備區(qū)】
從試劑盒中取出H1N1反應(yīng)混合液，在室溫下融化并振蕩混勻后，2000rpm離心10sec，按15μl量分裝到PCR反應(yīng)管中，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。（注：每次實(shí)驗(yàn)必須帶陰陽性質(zhì)控）
3. 加樣【樣本處理區(qū)】
分別加入10 μl的陰性對照、H1N1陽性對照（無需抽提）、樣品核酸提取產(chǎn)物，終體積為25μl/管，蓋緊反應(yīng)管，瞬時(shí)低速離心，轉(zhuǎn)移至檢測區(qū)。
4. PCR擴(kuò)增及熒光檢測【PCR檢測區(qū)】
將各反應(yīng)管按一定順序放入PCR儀上，按以下程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增：
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步驟 |
循環(huán)數(shù) |
溫度(℃) |
升溫速率* |
反應(yīng)時(shí)間(min:sec) |
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1 |
1 |
50 |
6℃/S |
10:00 |
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2 |
1 |
95 |
6℃/S |
00:20 |
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3 |
45 |
95 |
6℃/S |
00:02 |
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60 |
6℃/S |
00:20（收集熒光） |
檢測熒光選擇： H1（FAM），N1（HEX/VIC），內(nèi)標(biāo)（CY5），數(shù)據(jù)采集定在60℃。
*：升溫速率6℃/S建議使用撫生系列實(shí)時(shí)熒光PCR儀，其它儀器根據(jù)儀器具體性能選擇。
**：其它儀器比如ABI7500采集熒光設(shè)定為31s，對結(jié)果無影響。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
質(zhì)量控制
1. 陰性對照：無典型S型擴(kuò)增曲線。
2. 陽性對照：目標(biāo)基因通道呈典型S型擴(kuò)增曲線且Ct值≤30。
3. 在同時(shí)滿足1、2的條件下，實(shí)驗(yàn)有效，否則無效。
結(jié)果判讀
在滿足以上質(zhì)量控制條件，進(jìn)行如下分析（FAM通道為H1，HEX/VIC通道為N1，CY5通道為內(nèi)標(biāo)）：
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目標(biāo)基因結(jié)果 |
內(nèi)標(biāo)(CY5) |
結(jié)果判讀 |
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甲型流感病毒H1亞型 (FAM) |
Ct≤37 |
不作要求 |
甲型流感病毒H1亞型核酸陽性 |
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37<Ct<45 |
不作要求 |
復(fù)檢*** |
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無Ct值或Ct值=45 |
Ct＜45 |
甲型流感病毒H1亞型核酸陰性 |
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無Ct值或Ct值=45 |
無Ct值或Ct值=45 |
無效**** |
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甲型流感病毒N1亞型(HEX/VIC) |
Ct≤37 |
不作要求 |
甲型流感病毒N1亞型核酸陽性 |
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37<Ct<45 |
不作要求 |
復(fù)檢*** |
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無Ct值或Ct值=45 |
Ct＜45 |
甲型流感病毒N1亞型核酸陰性 |
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無Ct值或Ct值=45 |
無Ct值或Ct值=45 |
無效**** |
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待測標(biāo)本檢測結(jié)果37<Ct<45，此時(shí)樣本應(yīng)進(jìn)行重復(fù)檢測，如重復(fù)檢測結(jié)果Ct值小于45，曲線呈S型且有明顯指數(shù)增長期，則判斷為陽性，否則判斷為陰性。
該測試為無效測試，需要排查原因并重新檢測。
【檢驗(yàn)方法的局限性】
檢測結(jié)果不能直接作為臨床確診或排除病例的依據(jù)，僅供臨床醫(yī)生參考使用。同時(shí)，檢測結(jié)果和樣本的采集、保存及運(yùn)輸條件有關(guān)，其中任何環(huán)節(jié)失誤都可導(dǎo)致假陰性結(jié)果；如在樣本處理過程中發(fā)生交叉污染，則可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
【性能指標(biāo)】
1. 檢測限：本試劑盒檢測限為500copies/ml。
2. 精密度：兩例高、低陽性的樣本連續(xù)重復(fù)10次檢測，其Ct值的CV≤5%。
3. 特異性：與其感染部位相同或感染癥狀相似且常見的其他病原體以及人基因組無交叉反應(yīng)。
【注意事項(xiàng)】
1. 本試劑盒為體外檢測試劑，在使用時(shí)操作人員必須經(jīng)過基因擴(kuò)增或分子生物學(xué)方法檢測的專業(yè)培訓(xùn)，具有相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作資格，且其所在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護(hù)程序。
2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性請使用已校準(zhǔn)的移液器，選用合格的一次性使用的PCR反應(yīng)管、離心管、槍頭等進(jìn)行樣本處理及配液等操作，所有用具應(yīng)不含DNA 酶和RNA 酶。
3. 實(shí)驗(yàn)請嚴(yán)格分區(qū)操作：
第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)-準(zhǔn)備擴(kuò)增所需試劑；第二區(qū)：樣本處理區(qū)-待檢測樣本和對照品的處理；第三區(qū)：PCR檢測區(qū)-PCR擴(kuò)增檢測，各區(qū)物品均為專用，不得交換使用，避免污染，每次實(shí)驗(yàn)完后立即清潔工作臺(tái)。
4. 本產(chǎn)品使用前應(yīng)在室溫充分融化，混勻并瞬時(shí)低速離心。
5. 樣本處理應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，以保護(hù)操作人員安全和防止對環(huán)境的污染。
6. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)置陰性對照和陽性對照，不同批號(hào)的試劑請勿混用，在有效期內(nèi)使用試劑盒。
7. 待測樣本盡可能新鮮，提取過程應(yīng)嚴(yán)防RNA 酶污染及操作不當(dāng)導(dǎo)致的RNA降解。
8. -70℃保存的RNA樣本，加樣前應(yīng)在室溫充分融化、混勻并瞬時(shí)低速離心后使用。
9. 分裝有反應(yīng)液的反應(yīng)管應(yīng)扣蓋或裝入密實(shí)袋內(nèi)再轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
10. 加樣時(shí)應(yīng)使樣品完全加入反應(yīng)液中，不應(yīng)有樣品粘附于管壁上，加樣后應(yīng)盡快蓋緊管蓋。
11. 反應(yīng)液分裝時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，上機(jī)前注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，避免泄露污染儀器。
12. 擴(kuò)增完畢取出反應(yīng)管，密封在專用塑料袋內(nèi)，丟棄于指定地點(diǎn)。
13. 實(shí)驗(yàn)中用過的槍頭請直接打入盛有10%次氯酸鈉的廢物缸內(nèi)，并與其他廢棄物品一同丟棄。
14. 工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用物品經(jīng)常用10%次氯酸鈉、75%酒精和紫外燈進(jìn)行消毒。
15. 實(shí)時(shí)熒光PCR 儀需經(jīng)常校正和清潔載樣板板孔。
16. 本試劑盒涉及的待測樣本應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》和《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》相關(guān)要求。
17. 僅供科研使用，不可用于人體及動(dòng)物的治療或臨床診斷等用途。
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資料/datasheet
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