公司研發(fā)生產(chǎn)的Animal Tissue Optical Clearing Kit,即動物組織透明化試劑盒,是一種非常有效地對動物整個身體、整個器官、組織塊或類器官等非常簡單、便捷、快速地進行高質(zhì)量、高透明度透明化處理的試劑盒。經(jīng)本試劑盒透明化處理的動物樣品,可以與后續(xù)的免疫熒光、免疫組化、常規(guī)或熒光染色、生物發(fā)光等結(jié)合起來,可以實現(xiàn)組織塊、類器官、器官甚至整個動物體的三維成像,從而廣泛用于生物、醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究。
CUBIC (Clear, unobstructed brain/body imaging cocktails and computational analysis)是一種簡單、有效的動物組織透明化處理方法[1]。Animal Tissue Optical Clearing Kit和常規(guī)的CUBIC透明化效果基本一致。
本試劑盒提供的不僅可以促使組織、器官脫脂,還可以使組織、器官中的血紅素脫色。以調(diào)節(jié)組織的折射率,使其與溶劑折射率相匹配,盡量減少了組織中的散射光,利于光學(xué)成像。
本產(chǎn)品進行動物組織透明化的實驗流程參考圖1。

Animal Tissue Optical Clearing Kit動物組織透明化試劑盒)對動物組織、器官等進行透明化處理的實驗流程圖。
本試劑盒實驗操作簡單便捷。使用本產(chǎn)品提供的試劑簡單浸泡動物組織、器官等樣品,就可以輕松實現(xiàn)組織器官等樣品的透明化,無需使用任何特殊的儀器或設(shè)備。
本試劑盒處理的組織器官等樣品透明度高。傳統(tǒng)的組織透明化方法側(cè)重于均勻化單個組織的不匹配折射率,導(dǎo)致不透明度降低。本試劑盒所使用的透明化試劑具有很強的脫色和脫脂能力,再結(jié)合有效調(diào)節(jié)組織器官等的折光率,使其與溶液的折光率相匹配,以增加組織透光率,能有效實現(xiàn)組織器官等的高透明度。本產(chǎn)品處理的組織器官等,實測透明度通常都優(yōu)于SCALEVIEW-S、SeeDB2或SeeDB等方法[2]。本產(chǎn)品和Fujifilm/Wako的CUBIC Trial Kit,TCI公司的Tissue Clearing Reagent CUBIC-L [for Animals]與Tissue-Clearing Reagent CUBIC-R+(M) [for Animals]的透明化效果基本一致。本產(chǎn)品和Thermo的CytoVista? Tissue Clearing Kit與CytoVista? Tissue Clearing/Staining Kit,Abcam的Tissue Clearing Kit的使用效果相近。
本試劑盒透明化時間短。傳統(tǒng)的SCALEVIEW-S或SeeDB2方法組織器官的透明化時間相對都比較長[2]。本試劑盒通常在1-3周就可以輕松實現(xiàn)小鼠組織器官等的透明化。6周齡C57BL/6小鼠不同組織器官透明化實測所需要時間參考下表。實際檢測效果會因具體的實驗條件不同而存在差異,
下表僅供參考。

本試劑盒適用性廣。本試劑盒廣泛適用于動物組織器官甚至整體的透明化。本試劑盒用于6周齡C57BL/6小鼠不同組織器官透明化的實測效果請參考圖2。

圖2. 公司生產(chǎn)的Animal Tissue Optical Clearing Kit用于小鼠組織器官的透明化效果圖。本圖為6周齡C57BL/6小鼠整腦、腎、脾、腿部肌肉、心臟、小腸截段、胃、肺、白色脂肪、肝、大腸截段、胰腺透明化前后的實拍效果圖。圖片中每小格的長寬均為1mm,各組織或器官的處理前參數(shù)、關(guān)鍵試劑的使用量及時間參考見表1。實際結(jié)果會因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異,圖中效果僅供參考。
本試劑盒兼容熒光蛋白和后續(xù)的熒光染色。本試劑盒在使用過程中可以充分保護熒光蛋白的穩(wěn)定性,不會導(dǎo)致EGFP、EYFP、mCherry等熒光蛋白的變性而失去熒光。用于6周齡C57BL/6小鼠組織器官透明化處理后的DAPI染色效果請參考圖3。

圖3.Animal Tissue Optical Clearing Kit用于6周齡小鼠腦和小腸透明化處理后的DAPI染色效果圖。圖A為6周齡C57BL/6小鼠整腦DAPI染色4倍鏡下實拍效果圖。圖a和b分別為前腦和中腦40倍鏡下局部實拍效果圖。圖B為6周齡C57BL/6小鼠小腸截段DAPI染色4倍鏡下實拍效果圖。圖c和d分別為小腸絨毛和表面40倍鏡下實拍效果圖。比例尺均為100μm。實際結(jié)果會因?qū)嶒灄l件、檢測儀器等的不同而存在差異,圖片效果僅供參考。
保存條件:
-20℃保存,一年有效。須-20℃避光保存;100X Wash Buffer可以4℃保存;Mounting Solution可以室溫或4℃保存。
注意事項:
Solution使用前,需室溫靜置至完全融化,確保液體透明并且沒有沉淀。如果有晶體析出或溶液不透明,可以短時間置于55℃水浴溶解至完全透明并且沒有沉淀。
在高溫(>75℃)下失效,注意不可高溫處理。
處理后組織會變軟,請使用勺子小心取樣,不要使用鑷子,以免損傷組織。
很容易清除掉油性筆跡。使用時請盡量蓋緊蓋子,并用Parafilm密封蓋子,防止漏液。建議同時在管蓋和管體上進行樣品標(biāo)記,以免樣品信息丟失。
處理過程中如果出現(xiàn)濃烈的氨氣氣味,提示溶液可能已經(jīng)失效,請及時更換新鮮以免影響透明化效果。
使用時請勿劇烈搖晃,避免產(chǎn)生氣泡。如果不慎導(dǎo)致Solution中產(chǎn)生大量氣泡,請采用超聲波清洗機處理或抽真空處理(~0.1 MPa, ~30min)以去除氣泡,或室溫靜置(至少7-8小時)使氣泡自行消除,以免導(dǎo)致組織器官周圍或內(nèi)部出現(xiàn)氣泡。
Solution較粘稠,使用時請使用大口槍頭(可自行用剪刀剪去槍頭尖端)緩慢吸取,并緩慢加入至樣品中,請勿劇烈吹打,避免產(chǎn)生大量氣泡。
完成照片和視頻拍攝后的組織器官樣品可以去除Mounting Solution,然后可以浸泡在 Solution中室溫保存1周。時間越長,樣品透明度越高,但也會導(dǎo)致組織膨脹。完成照片和視頻拍攝后的樣品可以采用1X Wash Buffer清洗,再用30% (w/v)蔗糖溶液脫水,然后用O.C.T化合物包埋,并在-80℃長期保存。
對于較厚的切片(>2mm)或整個器官,每一步的孵育時間可以根據(jù)實際的透明化效果適當(dāng)延長。
為了保證長期有效,需要-20℃避光保存。但使用時,為了方便觀察組織透明化效果,可以在非嚴(yán)格避光條件下對樣品進行透明化處理。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。