01.檢測目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中脯氨酸羥化酶 2(PHD2)活性。
02.實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人脯氨酸羥化酶2(PHD2)水平。用純化的人脯氨酸羥化酶 2(PHD2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脯氨酸羥化酶2(PHD2)，再與 HRP 標(biāo)記的脯氨酸羥化酶 2(PHD2)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脯氨酸羥化酶2(PHD2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人脯氨酸羥化酶 2(PHD2)活性。
03.試劑盒組成:
04.樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右 （2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，
應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混 合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)
收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。 仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、
腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心 20 分 鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份
時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離
心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程 中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。 用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。
加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。 離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后
一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)
避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié) 果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的最高值，請將樣
品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實(shí)驗(yàn)前做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定稀釋 倍數(shù)。
05.自備實(shí)驗(yàn)器材（不提供，可代購）：
1. 酶標(biāo)儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）
2. 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板機(jī)或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 雙蒸水，去離子水，量筒等
6. 稀釋用聚丙烯試管
06.操作步驟：
07.注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使 用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗 滌時(shí)不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn) 誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦
使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物 質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值），請先
用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請最后乘 以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù) 為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
08.計(jì)算數(shù)據(jù)：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo) 準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以
稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回 歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘
以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。
09.檢測范圍：
0.5IU/L-26IU/L
10.保存條件及有效期：
1.試劑盒保存： 2-8℃。
2.有效期： 6 個月
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資料/datasheet
