還原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
GSH是細胞內(nèi)最主要的抗氧化巰基物質(zhì)，在抗氧化、蛋白質(zhì)巰基保護和氨基酸跨膜運輸?shù)戎芯哂兄匾饔?。還原型與氧化型比值（GSH/GSSG）是細胞氧化還原狀態(tài)的主要動態(tài)指標(biāo)。因此，測定細胞內(nèi)GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態(tài)。
測定原理：
DTNB與GSH反應(yīng)生成復(fù)合物，在412nm處有特征吸收峰；其吸光度與GSH含量成正比。
自備儀器和用品：
低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提?。?/p>
GSH測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動物）水浴中保溫30min。
3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μL蒸餾水，140μL試劑二，40μL試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。
4. 測定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μL上清液，140μL試劑二，40μL試劑三，混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。
注意：空白管只需要測定一次。
GSH含量計算公式：
GSH標(biāo)準曲線公式：y=1.5 x（x為GSH濃度，μ mol /mL；y為吸光值）
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按蛋白濃度計算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷（V樣×Cpr） =0.667×(A2－A1) ÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
GSH（μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2－A1) ÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)=0.667×(A2－A1) ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2－A1)
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣總：上清液總體積，1 mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量
b.使用96孔板測定的計算公式如下
GSH標(biāo)準曲線公式：y=0.75x（x為GSH濃度，μ mol /mL；y為吸光值）
（1）按蛋白濃度計算
GSH（μ mol/ mg prot）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷V樣÷Cpr =1.334×(A2－A1) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
GSH（μ mol/g 鮮重）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=1.334×(A2－A1) ÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
GSH（μ mol /104 cell）=(A2－A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)=1.334×(A2－A1) ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
GSH（μ mol/ mL）=(A2－A1) ÷0.75×V反總÷V樣 =1.334×(A2－A1)
V樣總：上清液總體積，1mL；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
注意事項：
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資料/datasheet
