維生素E（Vitamin E，VE）試劑盒說明書
微量法100T/48S
測定意義
維生素E（Vitamin E）是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中最主要的抗氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。
測定原理
VE還原Fe3+為Fe2+，F(xiàn)e2+與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在530nm有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、漩渦震蕩儀。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體2mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體2mL×1支，4℃保存。
試劑三：液體2mL×1支，4℃保存。
試劑四：液體6mL×1瓶，4℃保存。
樣本處理
測定操作
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對(duì)照管 |
測定管 |
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樣品（μL） |
100 |
100 |
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試劑一（μL） |
20 |
20 |
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試劑二（μL） |
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20 |
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試劑三（μL） |
20 |
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充分混勻，25℃反應(yīng)5min |
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試劑四（μL） |
60 |
60 |
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充分混勻，于微量石英比色皿/96孔板，無水乙醇調(diào)零，測定530nm處吸光值，記為A對(duì)照管和A測定管，△A=A測定管-A對(duì)照管。 |
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計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.22x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×Cpr）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×W÷V樣總）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）
= 9.09×（△A -0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷V樣×10
= 90.9×（△A -0.0065）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.11x + 0.0065 R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量計(jì)算
VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反總÷（V樣×Cpr）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
VE含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷0.11×V反總÷（V樣×W÷V樣總）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ W
3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VE含量（μg/104 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）
= 18.18×（△A -0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
VE含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷0.11×V反總÷V樣×10
= 181.8×（△A -0.0065）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.1mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)
若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，并在?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
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資料/datasheet
