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維生素B1測(cè)試盒（比色法）
AS6321382
貨號(hào) 純度 規(guī)格 目錄價(jià) 會(huì)員價(jià) 庫(kù)存 數(shù)量 購(gòu)買(mǎi)
AS6321382-100管/96樣 100管/96樣 ￥980.00 登錄查看
AS6321382-50管/48樣 50管/48樣 ￥500.00 登錄查看
產(chǎn)品詳情

維生素B1（Vitamin B1，VB1）試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法100T/96S

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

維生素B1（Vitamin B1）是構(gòu)成脫羧輔酶的主要成分，參與細(xì)胞代謝中的三羧酸循環(huán)，是維持機(jī)體正常代謝必須的水溶性維生素，在生物體能量代謝中有重要的作用。

測(cè)定原理

VB1在堿性條件下還原鐵氰化鉀生成亞鐵氰化鉀，亞鐵氰化鉀與Fe3+在弱酸條件下生成普魯士藍(lán)，在704nm有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、蒸餾水。

試劑組成和配制 

提取液：液體70mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體1mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體2mL×1支，4℃保存。

試劑三：液體2mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體5mL×1瓶，4℃保存。

試劑五：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。

樣本處理

  1. 組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸餾水0.4mL，混勻后于25℃，16000rpm離心10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織等蛋白含量較高的樣本建議離心20-30min）。
  2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入0.6mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；加蒸餾水0.4mL，混勻后于25℃，16000rpm離心10min，取上清測(cè)定。
  3. 血清：直接測(cè)定。                   

測(cè)定操作

 

空白管

測(cè)定管

樣品（μL）

 

20

試劑一（μL）

20

 

試劑二（μL）

16

16

試劑三（μL）

20

20

充分混勻，80℃反應(yīng)10min

提取液（μL）

16

16

試劑四（μL）

44

44

試劑五（μL）

24

24

H2O（μL）

60

60

充分混勻，靜置20min，于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定704nm處吸光值，記為A空白管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A空白管。

計(jì)算公式

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.017x+0.0031，R2 = 0.9991；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/mL；y為△A（A測(cè)定管-A空白管）

1. 按照蛋白含量計(jì)算

VB1含量（μg/mg prot）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷Cpr

                    = 58.8×（△A-0.0031）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VB1含量（μg/g鮮重）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（W÷V樣總）

                = 58.8×（△A-0.0031）÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.017÷（細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）

                     = 58.8×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.017

                  = 58.8×（△A-0.0031）

V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

b．用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0085x +0.0031，R2 = 0.9991；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μg/mL；y為△A（A測(cè)定管-A空白管）

1. 按照蛋白含量計(jì)算

VB1含量（μg/mg prot）=（△A -0.0031）÷ 0.0085÷Cpr

                    = 117.65×（△A-0.0031）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VB1含量（μg/g鮮重）=（△A-0.0031））÷ 0.0085÷（W÷V樣總）

                = 117.65×（△A-0.0031）÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VB1含量（μg/104 cell）=（△A-0.0031）÷ 0.0085÷（細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）

                     = 117.65×（△A-0.0031）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

VB1含量（μg/mL）=（△A-0.0031）÷ 0.0085

                  = 117.65×（△A-0.0031）

V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

 

注意事項(xiàng)

  1. 若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過(guò)2，請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
  2. 蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再重新測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
  3. 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定。
  4. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為0.1-10μg/mL。
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