食品中亞硝酸鹽含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
在食品中，亞硝酸鹽可與肉品中的肌紅素結(jié)合而更安定，在食品加工業(yè)中作為保色劑，以維持肉制品的良好外觀，并防止肉毒梭狀芽孢桿菌的產(chǎn)生，提高食用肉制品的安全，但是人體長(zhǎng)期攝入亞硝酸鹽過(guò)量的食品，可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。
測(cè)定原理：
在酸性條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng)生成重氮化合物，再與N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物，在540nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽或勻漿器、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液一：液體50 mL×1瓶，室溫保存。
提取液二：液體50 mL×1瓶，室溫保存。
提取液三：液體50 mL×1瓶，室溫保存。
粉劑四：粉劑 100 mg ×1支，室溫保存。
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理：
稱(chēng)取樣品約0.2g鮮重或0.05g干重，破碎，加入0.5 mL 提取液一，沸水浴15min，冷卻至室溫，加入0.5 mL提取液二，震蕩搖勻，加0.5 mL 提取液三，用鑷子加少量粉劑四（約1 mg），靜置30min，25℃，8000g離心15 min，取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟和操作表：
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測(cè)定管 |
空白管 |
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蒸餾水（μL） |
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70 |
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樣品（μL） |
70 |
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試劑一（μL） |
65 |
65 |
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試劑二（μL） |
65 |
65 |
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混勻，25℃靜置15min，于微量石英比色皿/96孔板中檢測(cè)540nm處吸光值A(chǔ)。 △A=A測(cè)定 - A空白 |
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注意：空白管只需測(cè)定一次。
亞硝酸鹽含量計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=0.234x + 0.0002，R2= 0. 999 x為標(biāo)準(zhǔn)品亞硝酸鈉濃度（μg/ml） y為吸光值A(chǔ)。
NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×V樣÷（V樣÷V樣總×W）×0.6668
=（A – 0.086）÷0.234×1.5×0.6668÷W
=4.27×（△A-0.0002）÷W
V樣總：加入提取液體積，1.5 mL； V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.07mL；W：樣品質(zhì)量，g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=0.141x +0.095，R2= 0. 9991 x為標(biāo)準(zhǔn)品亞硝酸鈉濃度（μg/ml） y為吸光值A(chǔ)。
NO2-（μg/g ）=（△A-0.0002）÷0.141×V樣÷（V樣÷V樣總×W）×0.6668
=（△A-0.0002）÷0.141×1.5×0.6668÷W
=7.09×（△A-0.0002）÷W
V樣總：加入提取液體積，1.5 mL； V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.07mL；W：樣品質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
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