海藻糖含量試劑盒說明書
微量法100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
海藻糖廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。由于海藻糖具有獨(dú)特的不同于其他碳水化合物的生物學(xué)特性，能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質(zhì)等惡劣環(huán)境下保護(hù)生物體細(xì)胞蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。
測定原理：
蒽酮比色法。具有靈敏度高﹑簡便快捷﹑適用于微量樣品的測定等優(yōu)點(diǎn)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板﹑研缽、濃硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 100ml×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存；
海藻糖提?。?/p>
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3S，間隔10S，重復(fù)30次），室溫靜置45min，振蕩3~5次，冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清。
2、組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），冰浴勻漿，室溫靜置45min，振蕩3~5次，冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清。
3、血清（漿）的處理：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.1mL血清（漿）加入1mL提取液），冰浴勻漿，室溫靜置45min，振蕩3~5次，冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清。
測定步驟：
3、工作液的配制：臨用前在試劑一中加入3.75mL蒸餾水后，緩慢加入21.25mL濃硫酸，不斷攪拌，充分溶解，待用；用不完的試劑4℃保存一周；
4、樣本測定：取60μL樣本和240μL工作液至EP管中，95度水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），自然冷卻至室溫，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，在620 nm 波長下記錄測定吸光度值A(chǔ)。
注意：由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性，請謹(jǐn)慎操作。
若吸光值大于1，請將樣本用提取液稀釋后再測定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
海藻糖含量計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 8.8976x+0.0729；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、按樣本鮮重計(jì)算：
海藻糖含量(mg/g 鮮重)= [V1×(A -0.0729)÷8.8976]÷(W×V1÷V2)=0.112×(A -0.0729) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
海藻糖含量(mg/mg prot)= [V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(V1×Cpr)=0.112×(A -0.0729) ÷Cpr。
4、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
海藻糖含量(μg/104 cell)=[1000×V1×(A -0.0729) ÷8.8976]÷(500×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729)
5、血清（漿）海藻糖含量計(jì)算
海藻糖含量（mg/mL）＝[V1×(A -0.0729）÷8.8976 )÷(V3×V1÷V2)=1.12×(A -0.0729)
1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，60μL=0.06mL；V2：加入提取液總體積1mL；；V3：加入血清（漿體積），0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為y = 4.4488x+0.0729；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、按樣本鮮重計(jì)算：
海藻糖含量(mg/g 鮮重)=[ V1×(A -0.0729)÷4.4488]÷(W×V1÷V2)=0.224×(A -0.0729) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
海藻糖含量(mg/mg prot)= [V1×(A -0.0729)÷4.4488]÷(V1×Cpr)=0.224×(A -0.0729) ÷Cpr。
4、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
海藻糖含量(μg/104cell)=[1000×V1×(A-0.0729)÷4.4488]÷(500×V1÷V2)=0.448×(A -0.0729)
5、血清（漿）海藻糖含量計(jì)算
海藻糖含量(mg/mL)=[V1×(A -0.0729）÷4.4488 )÷(V3×V1÷V2)=2.24×(A -0.0729)
1000：1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，60μL=0.06mL；V2：加入提取液總體積1mL；；V3：加入血清（漿體積），0.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
注意：最低檢測限為10μg/g鮮重或0.1μg/ mg prot
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資料/datasheet
