肌酸激酶（Creatine Kinase, CK）測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中，能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?；磻?yīng)，在能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用，是臨床診斷心腦疾病的一個(gè)重要指標(biāo)。
測(cè)定原理：
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH，導(dǎo)致340nm光吸收值增加。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑1瓶，4℃避光保存，使用前加10mL蒸餾水溶解。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。
工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑一和試劑二以1:1混合。使用前37℃溫育2min。
粗酶液提?。?/p>
測(cè)定操作表：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm。
2．在96孔板中加入40μL樣本和60μL蒸餾水，最后加入100μL工作液，立即混勻，37℃下測(cè)定初始吸光值A(chǔ)1與1min后的吸光值A(chǔ)2，ΔA＝A2-A1。
CK活性計(jì)算公式：
（1）按組織蛋白含量計(jì)算
酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。
CK活性（nmol/min/ mg prot）=
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 1608×△A÷Cpr
（2）按組織樣本質(zhì)量計(jì)算：
酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每克樣品1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。
CK活性（nmol/min/g 鮮重）= 
×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T= 1608×△A÷W
（3）按血清計(jì)算：
酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每升血清1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。
CK活性（nmol/min/mL）=
×V反總÷V樣÷T= 1608×△A
：NADPH摩爾消光系數(shù)，6220 L /mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.04mL；T，反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1. 配制好的工作液4℃穩(wěn)定7天，請(qǐng)配制后盡快使用。
2. 血清的CK不穩(wěn)定，采集樣本后盡快測(cè)定，4℃避光保存可穩(wěn)定24h。
3. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定，可選用BCA蛋白含量測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定。
4. OD值大于0.5可用提取液適當(dāng)稀釋樣品，并在計(jì)算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。
掃描二維碼
掃描二維碼 撫生公眾號(hào) |
 客服-夏菊花 |
 客服-陳筱筱 |
 客服-李瑞瑞 |
可可.jpg) 客服-郭笑笑 |
 客服-李爽 |
客服-林燕 |
資料/datasheet