土壤纖維素酶（Solid-cellulase，S-CL）活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法 100管/48樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
S-CL主要來(lái)源于土壤微生物，S-CL催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是主要的碳源營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
測(cè)定原理：
采用蒽酮比色法測(cè)定S-CL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。
需自備的儀器和用品：
酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、甲苯、硫酸（不允許快遞）和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自備）
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體40mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存； 臨用前加入5mL蒸餾水和45mL濃硫酸充分溶解待用。
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。
加樣表和測(cè)定步驟：
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對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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風(fēng)干土樣（g） |
0.05 |
0.05 |
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試劑一 (μL) |
50 |
50 |
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振蕩混勻15min |
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試劑二（μL ） |
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90 |
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試劑三（μL ） |
370 |
370 |
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蒸餾水（μL ） |
180 |
90 |
37℃振蕩反應(yīng)3h后，90℃水浴15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后
8000g 25℃離心10min，取上清，得糖化液
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糖化液 (μL) |
140 |
140 |
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試劑四 (μL) |
260 |
260 |
混勻， 90℃水浴10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，測(cè)620nm下吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-CL活力計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)
T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 2.5090x - 0.0462；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
S-CL活力（mg/d/g）＝(ΔA+0.0462) ÷2.5090×V反總÷W÷T =38.3×(ΔA+0.0462)
T：反應(yīng)時(shí)間，3h=1/8d； V反總：反應(yīng)體系總體積：0.6mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。
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