土壤全鐵試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
鐵元素是一種十分重要的植物營養(yǎng)元素,土壤中鐵含量直接影響著植物吸收利用以及生長代謝。
測定原理
在pH2-9范圍內(nèi),鹽酸羥胺將三價鐵轉(zhuǎn)化為二價鐵,與鄰菲羅琳反應(yīng)生成橙紅色配合物,在510nm有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制
提取劑:粉劑×1瓶,4℃保存。
提取液:液體100mL×4瓶,4℃保存。
試劑一:液體2mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體6mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體4mL×1瓶,4℃避光保存。
樣本處理
新鮮土樣風(fēng)干,過100目篩,按照土壤質(zhì)量(g):提取劑質(zhì)量(g)為1:4的比例(建議稱取約0.1g土樣,加入0.4g提取劑)緩慢加入提取劑于坩堝中,邊加邊攪拌均勻,然后在馬弗爐中550℃熔融10min,然后在920℃熔融30min,趁熱取出坩堝,將熔融物轉(zhuǎn)入燒杯,邊攪拌邊加4mL提取液,必要時加蓋,從燒杯口加入,防止溶液濺出,溶解30min后,5000g ,25℃離心10min,取上清液待測。
測定操作表
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空白管
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測定管
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樣本(μL)
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20
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試劑一(μL)
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20
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20
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試劑二(μL)
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60
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60
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試劑三(μL)
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40
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40
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H2O(μL)
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80
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60
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充分混勻,25℃靜置20min
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于微量石英比色皿/96孔板,蒸餾水調(diào)零,測定510nm處吸光值A(chǔ),分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管
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計算公式
- 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.1569x -0.0173,R2 = 0.9992
全鐵含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷ 0.1569×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 254.94×(△A+0.0173)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,4mL,W:樣本質(zhì)量,g
- 用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.0785x -0.0173,R2 = 0.9992
全鐵含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷ 0.0785×V反總÷(W×V樣÷V樣總)
= 509.55×(△A+0.0173)÷W
V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,4mL,W:樣本質(zhì)量,g