土壤銨態(tài)氮試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意:正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
土壤中的銨態(tài)氮可被土壤膠體吸附,呈交換性銨狀態(tài)氮肥,也可溶解在土壤溶液中,能直接被植物吸收利用,屬于速效性氮素。
測定原理
土壤中的銨態(tài)氮在強堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚藍,在625nm處有特征吸收峰,吸光值與銨態(tài)氮含量成正比。
自備實驗用品及儀器
天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、振蕩儀。
試劑組成和配制
提取液:液體110mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×2瓶,4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加4mL雙蒸水溶解,現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑二:液體8mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體2mL×1瓶,4℃保存。
樣本處理
按照土壤質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g新鮮土樣,加入1mL提取液),振蕩提取1h,10000g ,25℃離心10min,取上清液待測。
測定操作表
- 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至625nm,蒸餾水調(diào)零。
- 操作表
|
空白管
|
測定管
|
樣本(μL)
|
|
20
|
提取液(μL)
|
20
|
|
試劑一(μL)
|
80
|
80
|
試劑二(μL)
|
80
|
80
|
充分混勻,25℃靜置1h
|
試劑三(μL)
|
20
|
20
|
充分混勻,于微量石英比色皿/96孔板中,蒸餾水調(diào)零,測定625nm處吸光值A(chǔ),分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管
|
計算公式
- 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y =0.1522x-0.0009,R2= 0.9993
NH4+—N含量(mg/kg 鮮重)=(△A+0.0009)÷ 0.1522÷W
= 6.57×(△A+0.0009)÷W
W :樣本質(zhì)量,g
- 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.0761x-0.0009,R2= 0.9993
NH4+—N含量(mg/kg鮮重)=(△A+0.0009)÷ 0.0761÷W
= 13.14×(△A+0.0009)÷W
W:樣本質(zhì)量,g
注意事項
- 試劑一必須避光低溫保存,配制好的試劑一4℃保存不能超過20天。
- 浸提液最好在當日完成測定,如果不能完成,可冷凍保存,但不能超過兩天。