酸性土壤速效磷試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/96S
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分,包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷及有機(jī)態(tài)磷,土壤中速效磷是限制植物生長(zhǎng)主要因子之一。
測(cè)定原理
用雙酸法提取酸溶性磷和吸附態(tài)磷,用鉬銻抗比色法測(cè)定。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀。
試劑組成和配制
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體6mL×1支,4℃保存。
試劑二: 粉劑×1支,4℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水溶解。用不完的試劑4℃保存。
試劑三: 粉劑×3支,4℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水溶解。現(xiàn)配現(xiàn)用。
樣本處理
新鮮土樣風(fēng)干,過(guò)30-50目篩,按照土壤質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g土樣,加入1mL提取液),振蕩提取30min,10000g ,25℃離心10min,取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟
- 取試劑三一支,加入1mL蒸餾水充分溶解待用。
- 顯色液的配制(可測(cè)50個(gè)樣):取EP管一支,加入660μL試劑一,再加入100μL試劑二,充分混勻后,再加入240μL試劑三,充分混勻待用;配好的顯色液應(yīng)為黃色,若變藍(lán)則為磷污染;顯色液必須現(xiàn)配現(xiàn)用;若一次性測(cè)不了50個(gè)樣,可按比例縮小各試劑體積。
- 操作表
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空白管
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測(cè)定管
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樣本(μL)
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40
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提取液(μL)
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40
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顯色液(μL)
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20
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20
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H2O(μL)
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140
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140
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充分混勻,25℃靜置30min
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于微量石英比色皿/96孔板中,蒸餾水調(diào)零,測(cè)定660nm處吸光值A(chǔ),分別記為A空白管和A測(cè)定管,△A=A測(cè)定管-A空白管??瞻坠苤灰鲆还?。
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計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y =0.1252x-0.0041,R2 = 0.9957,x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/L),y為吸光值。
速效磷含量(mg/kg干重)=(△A+0.0041)÷ 0.1252×V樣÷(W×V樣÷V樣總)
= 7.987×(△A+0.0041)÷W
V樣:樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,約0.1g
- 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y =0.0626x-0.0041,R2 = 0.9957,x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/L),y為吸光值。
速效磷含量(mg/kg干重)=(△A+0.0041)÷ 0.0626×V樣÷(W×V樣÷V樣總)
= 15.97×(△A+0.0041)÷W
V樣:樣本體積,0.04mL;V樣總:加入提取液體積,1mL,W:樣本質(zhì)量,約0.1g
注意事項(xiàng)
- 配好的顯色液當(dāng)天用完,變藍(lán)則不能使用。
- ΔA線性范圍為:0.01-1.5。
- 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為:0.1mg/L-20mg/L。