土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）
試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
S-LAP是一類能水解肽鏈N-末端為亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
測(cè)定原理：
S-LAP分解L-亮氨酰對(duì)硝基苯胺生成對(duì)硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算S-LAP活性。
自備用品：
酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體35mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；
S-LAP測(cè)定步驟：
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試劑名稱 |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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新鮮土樣（g） |
0.05 |
0.05 |
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試劑一（μL） |
300 |
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試劑二（μL） |
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300 |
混勻， 37℃振蕩反應(yīng)1h后，8000g 4℃離心10min，取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中，405nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
S-LAP活力單位的計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
單位的定義：每天每g土樣每天生成1 μmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V反總÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，3×10-4 L；ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量，0.05g。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
單位的定義：每天每g土樣每天生成1 μmol 對(duì)硝基苯胺定義為一個(gè)酶活力單位。
S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V反總÷（ε×d）×106÷W÷T=29.6×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，3×10-4 L；ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量，0.05g。
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資料/datasheet
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