土壤堿性木聚糖酶（Soil Basic Xylanase，S-BAX）測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中，BAX一般分離自最適生長pH為9 -11的微生物。
測定原理：
BAX在堿性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計算BAX活力。
自備實驗用品及儀器：
天平、常溫離心機、震蕩儀、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理
新鮮土樣風(fēng)干，過30-50目篩。
測定操作表：
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對照管 |
測定管 |
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土樣（g） |
0.02 |
0.02 |
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緩沖液（μL） |
150 |
100 |
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試劑一（μL） |
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50 |
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混勻，50℃震蕩反應(yīng)30min，立即90℃水浴10min，8000g，25℃離心10min，取上清100μL |
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試劑二（μL） |
100 |
100 |
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混勻，90℃水浴中顯色5min，取180μL于微量石英比色皿/96孔板測定540nm處吸光值A(chǔ)，分別記為A對照管、A測定管，△A=A測定管-A對照管。 |
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S-BAX計算公式：
標準曲線：y = 2.8432x - 0.0293，R2 = 0.9985
酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。
S-BAX活力（μmol/d /g 土樣）=（△A+0.0293）÷ 2.8432×V反總×103÷ W÷T÷ 150
= 16.88×（A540+0.0058）÷ W
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時間，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.4216x - 0.0293，R2 = 0.9985
酶活定義：50℃，pH9.0條件下，每克土壤每天分解木聚糖產(chǎn)生1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。
S-BAX活力（μmol/d /g土樣）=（△A+0.0293）÷ 1.4216×V反總×103÷ W÷T÷ 150
= 33.76×（A540+0.0058）÷ W
V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；T：反應(yīng)時間，1/48d；1000：1mmol/L =103μmol/L；150：木糖分子量。
注意事項：
1. 保證震蕩反應(yīng)30min，使酶與底物充分接觸。
2. 注意90℃水浴防止爆開，以免改變反應(yīng)體系。
掃描二維碼
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資料/datasheet
