土壤酸性轉(zhuǎn)化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
S-AI在pH 為4.5~5.0（酸性）條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。
測(cè)定原理：
S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。
自備用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存;
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入25mL試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存;
試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或37度烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
測(cè)定步驟和加樣表：
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試劑名稱（μL） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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風(fēng)干土樣（g） |
0.05 |
0.05 |
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試劑一 |
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400 |
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試劑二 |
400 |
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混勻， 37℃準(zhǔn)確水浴30min后，95℃水浴10min（蓋緊，以防水分散失），流水冷卻后
充分混勻（以保證濃度不變），10000g 25℃離心10min，取上清液
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上清液 |
200 |
200 |
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試劑三 |
100 |
100 |
混勻，95℃水浴10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻， 510nm處，記錄各管吸光值A(chǔ)，如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測(cè)定(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù))，ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。
S-AI活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)S-AI活力單位。
S-AI活力（mg/d /g土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V反總÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)
V反總：反應(yīng)體系總體積：0.4mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.05g；1mg=1000μg。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0008x -0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個(gè)S-AI活力單位。
S-AI活力（mg/d/g土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V反總÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)
V反總：反應(yīng)體系總體積：0.4mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.05g；1mg=1000μg。
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資料/datasheet
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