土壤脂肪酶（Solid-Lipase，S-LPS）活性試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。
測(cè)定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測(cè)定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算LPS活性。
自備儀器和用品：
研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體65mL×2瓶，4℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
試劑三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自備）。
試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體10 μL×1瓶，10 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。
樣本處理
建議稱取約0.1g土樣，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取15min，4℃，4000g離心10min，取上清待測(cè)。
S-LPS測(cè)定操作：
|
試劑名稱（μL） |
空白管 |
測(cè)定管 |
|
蒸餾水 |
150 |
|
|
樣本 |
|
50 |
|
試劑一 |
300 |
300 |
|
試劑二 |
|
100 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min
|
試劑三 |
800 |
800 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液
|
試劑名稱（μL） |
空白管 |
測(cè)定管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
|
上清液 |
400 |
400 |
|
|
標(biāo)準(zhǔn)品 |
|
|
400 |
|
試劑四 |
100 |
100 |
100 |
37℃振蕩反應(yīng)5 min后，靜置5min，取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm處測(cè)定吸光值。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
S-LPS活性計(jì)算公式：
活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個(gè)酶活單位。
S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測(cè)定管－A空白管)÷（A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管）]÷W
C標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。
掃描二維碼
掃描二維碼 撫生公眾號(hào) |
 客服-夏菊花 |
 客服-陳筱筱 |
 客服-李瑞瑞 |
可可.jpg) 客服-郭笑笑 |
 客服-李爽 |
客服-林燕 |
資料/datasheet