原果膠含量試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/48S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
果膠是植物細(xì)胞壁主要組成成分之一，分為水溶性果膠和不溶性果膠，即原果膠。因其具有良好的乳化、增稠和凝膠作用，在食品、紡織、印染、煙草、冶金等領(lǐng)域具有較廣泛的應(yīng)用。
測(cè)定原理
原果膠在稀酸中水解為可溶性果膠，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸，產(chǎn)物在強(qiáng)酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物，在530 nm處有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
天平、研缽、常溫離心機(jī)、水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、濃硫酸和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一：液體100mL×2瓶，4℃保存。
提取液二：液體100mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，4℃保存。
試劑一：濃硫酸，自備。
試劑二：液體2mL×1支，4℃保存。
試劑三：液體3mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理
將組織樣品搗碎，按照樣品質(zhì)量(g)和提取液一體積(mL)為1: 20的比列（建議取約0.05g樣品，加入1mL提取液一），置于90℃恒溫水浴鍋中浸提30min，取出冷卻后于5000g、 25℃離心10min，去掉上清，沉淀中再加入1mL提取液一重復(fù)操作一次，離心后去上清，沉淀中加入1mL提取液二，置于90℃恒溫水浴鍋中水解1h，取出冷卻后于8000g、25℃離心15min，取上清液待測(cè)。
測(cè)定操作表
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空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣本（μL） |
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30 |
30 |
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標(biāo)準(zhǔn)品（μL） |
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30 |
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濃硫酸（μL） |
180 |
180 |
180 |
180 |
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混勻、90℃水浴10min，取出后冷卻 |
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試劑二（μL） |
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30 |
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試劑三（μL） |
30 |
30 |
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30 |
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混勻，25℃靜置30min |
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蒸餾水（μL） |
90 |
60 |
60 |
60 |
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充分混勻，取200μL置于微量石英比色皿/96孔板中，測(cè)定530nm處吸光值，分別記為A1、A2、A3和A4?！鰽1=A2-A1，△A2=A4-A3 |
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注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式
原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W÷V樣總) = 0.25×△A2÷△A1÷W
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.25mg/mL；V標(biāo)：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02mL； V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本鮮重，g。
原果膠含量(mg /g 鮮重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V標(biāo)) ×△A2÷△A1÷(W÷V樣總) =0.25×△A2÷△A1÷W
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，0.25mg/mL；V標(biāo)：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.02mL； V樣總：加入提取液體積，1mL； W：樣本鮮重，g。
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