抗體(antibody,Ab)是機體在體內(nèi)存在的外來分子、微生物等抗原物質(zhì)刺激下,由B淋巴細胞或記憶細胞增殖分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig),主要分布在血清中,也分布于組織液及外分泌液中。抗體特異性鑒定是免疫化學技術(shù)中,確保抗原-抗體反應專一性的基礎(chǔ)。從根本上驗證特異性,投稿國際期刊,常常需要準備這方面數(shù)據(jù)。
蛋白質(zhì)通過鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質(zhì)的溶解度,使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出。蛋白質(zhì)的沉淀(protein precipitation),沉淀是溶液中的溶質(zhì)由液相變成固相析出的過程。蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象,稱為蛋白質(zhì)的沉淀。蛋白質(zhì)沉淀常用的方法有鹽析、等電點沉淀、有機溶劑沉淀、生物堿試劑與某些酸沉淀等。
細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導入真核細胞的技術(shù)。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展,轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。
ELISA實驗通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體干擾物質(zhì)。因此,不嚴格的洗滌容易出現(xiàn)交叉污染或洗不干凈背景高。 優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌,洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號,從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留,在最后一步產(chǎn)生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景,從而帶來不理想的結(jié)果。在做ELISA實驗時,洗板有兩種方法:手工法洗板 和 洗板機洗板。二者沒有本質(zhì)的差別,只要操作合乎要求,均能得到正確、可靠的結(jié)果。
ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗是目前臨床上最常用的免疫學檢驗方法,由于其試劑穩(wěn)定,易保存,操作簡便,結(jié)果判斷較客觀,既適宜于大規(guī)模篩查試驗,又可用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析,目前已廣泛用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子檢測等領(lǐng)域。ELISA有敏感性高,特異性強,重復性好的特點,但其同時存在影響因素多的不足,現(xiàn)就實驗操作中常見的影響因素進行分析實驗,以提高的實驗質(zhì)量。