過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）試劑盒(紫外吸收法)說(shuō)明書(shū)
微量法 100管/96樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理：
H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能夠分解H2O2，使反應(yīng)溶液240nm下的吸光度隨反應(yīng)時(shí)間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出CAT活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
工作液：液體24mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提?。?/p>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
注意事項(xiàng)：出現(xiàn)負(fù)值怎么辦？
首先檢查吸光值是否超過(guò)3，如果超過(guò)3很可能是沒(méi)有用UV板，請(qǐng)換用UV板。如果未超過(guò)3，仍然出現(xiàn)負(fù)值則檢查反應(yīng)過(guò)程是否產(chǎn)生氣泡，氣泡多說(shuō)明酶活性太高，氣泡影響產(chǎn)生了負(fù)值，可以將樣本用提取液稀釋10倍后再檢測(cè)。如果稀釋樣本或反應(yīng)體系沒(méi)有產(chǎn)生氣泡仍然出現(xiàn)較小的負(fù)值，說(shuō)明該樣本測(cè)不到該酶活。CAT活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）CAT活力的計(jì)算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(nmol/min/mL)= [ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=459×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=459×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=459×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(nmol/min/104 cell)＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T =0.917×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、血清（漿）CAT活力的計(jì)算:
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=918×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中CAT活力計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T =918×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T=918×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化1nmol H2O2降解定義為一個(gè)酶活力單位。
CAT(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=1.836×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：H2O2摩爾消光系數(shù)，4.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬(wàn)。
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