植物原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins, OPC）試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100T/48S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一類黃烷醇單體及其聚合體的多酚化合物，廣泛存在于植物的各種器官中，具有極強(qiáng)的抗氧化性和清除自由基的作用，廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥，食品，化妝品，保健品行業(yè)。
測(cè)定原理:
在酸性條件下，植物原花青素A環(huán)上的間苯二酚和間苯三酚與香草醛發(fā)生縮合反應(yīng)，產(chǎn)生有色化合物，在500nm處有特征吸收峰，測(cè)定500nm光吸收值，可計(jì)算植物中原花青素的含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水、鹽酸、無(wú)水乙醇和甲醇。
試劑組成和配制:
提取液：60%乙醇，自備，4℃保存。（60mL無(wú)水乙醇溶于40mL蒸餾水）
試劑一：8%鹽酸10mL，自備，4℃保存。（800μL鹽酸溶于9.2mL甲醇）
試劑二：粉劑0.1g×1瓶，4℃避光保存，臨用前加10mL甲醇溶解。
測(cè)定工作液：臨用前按照用量將試劑一和試劑二按照1:1混合。
空白工作液：臨用前按照用量將試劑一和甲醇按照1:1混合。
OPC提取:
稱取約0.1g樣本，加入2mL提取液，勻漿后，60℃振蕩提取2h， 10000g，25℃，離心10min，取上清待測(cè)。
測(cè)定操作表:
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對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣本（μL） |
40 |
40 |
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測(cè)定工作液（μL） |
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160 |
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空白工作液（μL） |
160 |
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混勻，30℃水浴30min，于微量石英比色皿/96孔板中檢測(cè)500nm處吸光值，ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照，每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
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OPC計(jì)算公式:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0194x+0.0006，R2=0.999
OPC含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10-3
= 0.515×(ΔA-0.0006）÷W
V樣總：加入提取液體積，2mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；W：樣品質(zhì)量，g
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0097x+0.0006，R2=0.999
OPC含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×10-3
= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W
V樣總：加入提取液體積，2mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04mL；W：樣品質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1、配制好的試劑二應(yīng)盡快使用，4℃保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月。
2、吸光度變化應(yīng)該控制在0.01～0.8之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。
3、最低檢出限為10μg/g。
掃描二維碼
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