過氧化物酶(Peroxidase，POD)試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
測定原理：
POD催化H2O2氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體100μL×1支，4℃保存；
試劑三：液體100μL×1支，4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
注意：
如果ΔA小于0.005，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA大于0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
POD活性計算：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）POD活性
單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
計算公式：
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =2000×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =2000×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =2000×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =4×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）POD活性
單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.005÷T =4000×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）＝ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.005÷T =4000×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/g 鮮重）＝ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.005÷T =4000×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算
單位定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.005為一個酶活力單位。
POD（U/104 cell）＝ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.005÷T =8×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL； V樣：加入樣本體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
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資料/datasheet
