黃嘌呤氧化酶（xanthione oxidase, XOD）試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
XOD（EC 1.17.3.2）催化黃嘌呤氧化生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來源之一；同時也是核苷酸代謝的關(guān)鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動物的心，肺，肝臟等組織中，當(dāng)肝功能受損時，XOD大量釋放到血清中，對肝損害的診斷具有特異性的意義。
測定原理：
XOD催化黃嘌呤產(chǎn)生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：30mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?strong>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟：
5、在微量石英比色皿或96孔UV板中加入10μL樣本和250μL工作液，立即混勻并計時，記錄290nm下初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA＝A2-A1。
XOD活性計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）XOD計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=2131×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中XOD計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr)÷T =2131×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W ×V樣÷V樣總）÷T=2131×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=4.26×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×104 L/ mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）XOD計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=4262×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中XOD計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr)÷T =4262×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =4262×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每一萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol 尿酸定義為一個酶活力單位。
XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（500×V樣÷V樣總）÷T=8.52×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數(shù)，1.22×104 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500萬。
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資料/datasheet
