總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
研究意義：
測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。
測(cè)定原理：
在酸性環(huán)境下，還原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的Fe2+-TPTZ的能力反映了總抗氧化能力。
自備實(shí)驗(yàn)用品：
恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，使用前預(yù)冷。
試劑一：液體15mL×1瓶，避光保存。
試劑二：液體1.5mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體1.5mL×1瓶，避光保存。
混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按10:1:1的比例混合，使用前37℃預(yù)溫。
樣品的制備：
(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品
血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測(cè)定。
(2) 組織樣品
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
(3) 細(xì)胞樣品
按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
操作步驟：
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空白管 |
測(cè)定管 |
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混合液（μL） |
180 |
180 |
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樣品（μL） |
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6 |
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雙蒸水（μL） |
24 |
18 |
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充分混勻，反應(yīng)20min，于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定593nm吸光值，△A= A測(cè)定-A空白 |
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注意：空白管只需測(cè)定一次。
總抗氧化能力計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.8442x-0.0048，R2=0.9979
單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。
總抗氧化能力（U/g 鮮重）=（△A+0.0048）÷ 0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=59.228×（△A+0.0048）÷W
單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。
總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T
=59.228×（△A+0.0048）÷Cpr
單位定義：每萬個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。
總抗氧化能力（U/104cell）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000×V樣÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)））÷T
= 59.228×（△A+0.0048）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
單位定義：每毫升樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。
總抗氧化能力（U/mL）=（△A+0.0048）÷0.8442×1000÷T
= 59.228×（△A+0.0048）
V樣總：加入提取液體積，1 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，6μL；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.4221x - 0.0048；R2=0.9979
單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。
總抗氧化能力（U/g 鮮重）=（△A+0.0048）÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=118.455×（△A+0.0048）÷W
單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。
總抗氧化能力（U/mg prot）=（△A+0.0048）÷0.4221×1000×V樣÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T
=118.455×（△A+0.0048）÷Cpr
單位定義：每萬個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。
總抗氧化能力（U/104cell）=（△A+0.0048）÷0.4221×1000×V樣÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)））÷T
= 118.455×（△A+0.0048）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）
單位定義：每毫升樣本每分鐘產(chǎn)生1μmolFe2+-TPTZ定義為一個(gè)酶活力單位。
總抗氧化能力（U/mL）=（△A+0.0048）÷0.4221×1000÷T
= 118.455×（△A+0.0048）
V樣總：加入提取液體積，1 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，6μL；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
注意事項(xiàng)：
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