植物類(lèi)黃酮(Flavonoid)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法100管/96樣
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
類(lèi)黃酮是一類(lèi)多苯化合物,屬于植物次生代謝物,對(duì)人體具有消炎,抗菌,降血脂,清除體內(nèi)羥自由基,預(yù)防癌癥等作用。
測(cè)定原理
在堿性亞硝酸鹽溶液中,類(lèi)黃酮與鋁離子形成在510nm處有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物,測(cè)定樣品提取液在510nm處的吸光值,即可計(jì)算樣品類(lèi)黃酮含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:60%乙醇,自備。
試劑一:液體1mL×1管,4℃保存。
試劑二:液體1mL×1管,4℃保存。
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。
類(lèi)黃酮提取
將樣本烘干至恒重,粉碎,過(guò)40目篩之后,稱(chēng)取約0.02g,加入2mL提取液,60℃振蕩提取2h,10000g,25℃,離心10min,取上清待測(cè)。
測(cè)定操作表
- 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至510nm,蒸餾水調(diào)零。
- 操作表
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空白管
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測(cè)定管
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樣本待測(cè)液(μL)
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108
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蒸餾水(μL)
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108
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試劑一(μL)
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6
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6
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混勻,25℃靜置6min
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試劑二(μL)
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6
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6
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混勻,25℃靜置6min
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試劑三(μL)
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80
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80
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混勻,25℃靜置15 min,測(cè)定510nm處吸光值。ΔA=A測(cè)定-A空白,空白管只要做一管。
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類(lèi)黃酮含量計(jì)算公式
- 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 5.02x+0.0007,R2 = 0.9996
類(lèi)黃酮含量(mg/g 干重)=(ΔA -0.0007)÷5.02÷(W÷V樣總)= 0.398×(ΔA -0.0007)÷W
V樣總:加入提取液體積,2.5mL; V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.108mL; W:樣品質(zhì)量,g
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 2.51x+0.0007,R2 = 0.9996
類(lèi)黃酮含量(mg/g 干重)=(ΔA -0.0007)÷2.51÷(W÷V樣總)= 0.797×(ΔA -0.0007)÷W
V樣總:加入提取液體積,2mL;V樣:反應(yīng)中樣品體積,0.108mL;W:樣品質(zhì)量,g
最低檢出限為10μg/g。