脂肪酶（LPS）活性試劑盒說明書
微量法100/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。
測定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算LPS活性。
自備儀器和用品：
研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、甲苯80mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體65mL×2瓶，4℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
試劑三：甲苯80mL×1瓶，4℃保存（自備）。
試劑四：液體10mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準品：液體10 μL×1瓶，10 μmol/mL的標(biāo)準溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。
粗酶液提?。?/p>
LPS測定操作：
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試劑名稱（μL） |
空白管 |
測定管 |
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蒸餾水 |
150 |
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樣本 |
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50 |
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試劑一 |
300 |
300 |
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試劑二 |
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100 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min
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試劑三 |
800 |
800 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min后，8000g，25℃，離心10min，取上清液
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試劑名稱（μL） |
空白管 |
測定管 |
標(biāo)準管 |
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上清液 |
400 |
400 |
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標(biāo)準品 |
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400 |
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試劑四 |
100 |
100 |
100 |
37℃振蕩反應(yīng)5 min后，靜置5min，取200μL上層液加入微量石英比色皿/96孔板，于710nm處測定吸光值。
注意：空白管和標(biāo)準管只需測定一次。
LPS活性計算公式：
1. 組織、細菌或細胞LPS活性
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準管- A空白管）]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準管- A空白管）]÷W
（3）按照細菌或者細胞數(shù)量計算
活性單位定義：37℃中每104個細胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準品×(A測定管-A空白管)÷（A標(biāo)準管- A空白管）]×V反總÷（細胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準管- A空白管）]÷細胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/mL) = [C標(biāo)準品×(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標(biāo)準管- A空白管）]
C標(biāo)準品：10 μmol/mL；V反總：反應(yīng)總體積，0.8mL；V樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，10 min。
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資料/datasheet
