淀粉分支酶（Starch branching enzyme，SBE）試劑盒說明書
微量法100管/48樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義
SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶，測定SBE活性在淀粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。
測定原理
直鏈淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收，SBE使直鏈淀粉含量減少，從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在660nm吸收值，一定時間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨用前每支加入1mL蒸餾水，95℃沸水浴充分溶解后備用；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體13mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體1mL×1瓶，4℃保存；
粗酶液提取
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到660 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
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試劑名稱（μL） |
對照管 |
測定管 |
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95℃水浴1min后滅活的粗酶液 |
65 |
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粗酶液 |
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65 |
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試劑一 |
85 |
85 |
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試劑二 |
10 |
10 |
混勻，37℃準(zhǔn)確保溫20 min，置95℃水浴中5 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻
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試劑三 |
130 |
130 |
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試劑四 |
10 |
10 |
混勻，室溫靜置10min，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，660nm處讀取各管吸光值。每個測定管需設(shè)個一個對照管。
注意：
1、可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行5min 95℃沸水浴處理。2、試劑二如有沉淀，務(wù)必沸水浴溶解后使用。
SBE活力單位的計算
1、按照蛋白濃度計算
單位的定義：以波長660nm的吸光度下降百分率表示，每mg蛋白在反應(yīng)體系中每降低1％碘藍(lán)值為一個酶活性單位。
SBE活性(U/mg prot)=( A對照管-A測定管)/A對照管÷Cpr ×100
2、按照樣本鮮重計算
單位的定義：以波長660nm的吸光度下降百分率表示，每g組織在反應(yīng)體系中每降低1％碘藍(lán)值為一個酶活性單位。
SBE活性(U/g 鮮重)=(A對照管-A測定管)/A對照管÷(W÷V樣總)×100
V樣總：提取液總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
掃描二維碼
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資料/datasheet
