甘油三酯（triglyceride, TG）含量測定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義：
TG是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細(xì)胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。
測定原理：
用異丙醇提取TG，脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H2O2，過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在505 nm處有特征吸收峰。
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配置：
試劑一：液體120 mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體12 mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體12 mL×1瓶，4℃避光保存。
TG的提?。?/strong>
2、細(xì)胞、細(xì)菌中TG的提?。合仁占?00-500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，離心后棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s），8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測液。
3、血清（漿）樣品：直接測定。
測定操作：
酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到505 nm。
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試劑（μL） |
空白管 |
測定管 |
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樣本 |
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10 |
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試劑一 |
10 |
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試劑二 |
95 |
95 |
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試劑三 |
95 |
95 |
混勻，室溫下靜置20min，于505 nm波長處讀取吸光值，記為A空白和A測定，△A=A測定-A空白?？瞻坠苤恍铚y一管。
計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.3261x - 0.0199； R2 = 0.9979；x：標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL） y：吸光值差值ΔA。
1. 血清（漿）中甘油三酯含量計(jì)算：
TG含量（mg/mL）=（ΔA+0.0199）÷ 0.3261=3.07×（ΔA+0.0199）
2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中甘油三酯含量計(jì)算：
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
TG含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.3261×V樣÷(Cpr×V樣）=3.07×（ΔA+0.0199）÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
TG含量（mg/ g 鮮重）=（ΔA+0.0199）÷0.3261×V樣÷(W×V樣÷V樣總）=3.07×（ΔA+0.0199）÷ W
V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入試劑一體積，1 mL；W：樣本質(zhì)量，g；
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。
注意事項(xiàng)：
1. 試劑盒中有易揮發(fā)性物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應(yīng)該及時蓋緊。
2. 最低檢出限為100μg/mL。
掃描二維碼
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資料/datasheet
