總膽固醇（total cholesterol，TC）含量測(cè)定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
TC包括游離膽固醇和膽固醇酯。TC是指組織中所有脂蛋白所含膽固醇之總和。
測(cè)定原理：
利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC；進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化，生成△4-膽甾烯酮和H2O2；最后利用過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成紅色醌類化合物；在500nm有特征吸收峰，其顏色深淺與TC含量成正比。
自備儀器和用品：
水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96孔板。
試劑組成和配置：
試劑一：異丙醇100mL（自備）；
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體40μL×1瓶，4℃保存；
TC標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，0.5μmol/mL，4℃保存。
TC的提取：
1、組織中TC的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清，即TC待測(cè)液。
2、細(xì)胞、細(xì)菌中TC的提?。合仁占?00-500萬細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強(qiáng)度20％，超聲2s，停1s），即TC待測(cè)液。
3、血清（漿）等樣品：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
1. /酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到500 nm。
2. TC工作液的配制：臨用前，吸取約0.8mL試劑二分別加入試劑三和試劑四瓶中，充分溶解后再全部轉(zhuǎn)移回試劑二瓶中，充分混勻，TC工作液置于37℃水浴10min。用不完的工作液4℃保存一周。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管：依次在96孔板中加入20μL FC標(biāo)準(zhǔn)液和180μL TC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A標(biāo)準(zhǔn)管。
4. 測(cè)定管：依次在96孔板中加入20μL FC待測(cè)液和180μLTC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
5. 空白管：依次在96孔板中加入20μL 試劑一和180μLTC工作液，混勻，37℃靜置3h后于500nm測(cè)定A測(cè)定管。
注意：標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)定一次。
計(jì)算公式：
1. 血清（漿）中TC含量計(jì)算：
TC（μ mol /dL）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×100
=50×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；100 mL：1dL=100 mL。
2. 組織中TC含量計(jì)算：
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
TC（μ mol / mg prot）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
= 0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
TC（μ mol / g 鮮重）= C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
= 0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL；樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g/mL
3. 細(xì)胞、細(xì)菌中TC含量計(jì)算：
TC（μ mol /104 cell）=C標(biāo)準(zhǔn)液×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L）
=0.5×（A測(cè)定管-A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷細(xì)菌或細(xì)胞（104 cell /L）
C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/mL。
最低檢出限為1nmol/mL。
掃描二維碼
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資料/datasheet
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