| 貨號 | 純度 | 規(guī)格 | 目錄價(jià) | 會(huì)員價(jià) | 庫存 | 數(shù)量 | 購買 |
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| AS6321193-100管/96樣 | 100管/96樣 | ￥7900.00 | 登錄查看 |
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磷脂酶C（ Phospholipases C，PLC ）試劑盒說明書
微量法100T/96S
注意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
磷脂酶C（EC3.1.4.3）是一種水解甘油磷酸酯C3位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶，廣泛存在于微生物及動(dòng)植物的組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長發(fā)育等方面具有重要作用。
測定原理
磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對硝基苯酚，在410nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體102mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體8mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取
測定操作
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空白管 |
測定管 |
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樣品（μL） |
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20 |
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試劑一（μL） |
20 |
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試劑二（μL） |
100 |
100 |
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充分混勻，37℃反應(yīng)30min |
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試劑三（μL） |
80 |
80 |
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充分混勻，于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調(diào)零，測定410nm處吸光值，分別記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管。 |
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酶活計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0191x - 0.0103，R2 = 0.9991
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T
= 17.45×（△A+0.0103）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V反總÷V樣÷T
= 17.45×（△A+0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0095x - 0.0103，R2 = 0.9991
1．按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 35.09×（△A+0.0103）÷ Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
= 35.09×（△A+0.0103）÷ W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活性定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/104 cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T
=35.09×（△A+0.0103）÷ 細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計(jì)算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC產(chǎn)生1nmol對硝基苯酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
PLC活性（nmol/min/mL）= （△A+0.0103）÷ 0.0095×V反總÷V樣÷T
= 35.09×（△A+0.0103）
V反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
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資料/datasheet
