漆酶（Laccase）試劑盒說明書
微量法 100T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍(lán)氧化酶家族，廣泛分布于真菌和高等植物中，具有較強(qiáng)的氧化還原能力，在紙漿生物漂白，環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。
測定原理
漆酶分解底物ABTS產(chǎn)生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數(shù)遠(yuǎn)大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存。
工作液：粉劑×1瓶，4℃避光保存，臨用前加15mL試劑一溶解；用不完的試劑4℃保存一周。
酶液提取
測定操作表
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對照管 |
測定管 |
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樣本（μL） |
45 |
45 |
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試劑一（μL） |
255 |
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工作液（μL） |
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255 |
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60℃水浴20min后冷卻至室溫，取200μL反應(yīng)液于微量石英比色皿/96孔板中測定420nm處吸光值A(chǔ)，△A=A測定管-A對照管 |
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注意：
酶活性計算公式
a．用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 9.26×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= 
×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /104 cell）= 
×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T= 9.26×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /L）= 
×V反總÷V樣÷T= 9260×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.3mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /mg prot）= 
×V反總÷（V樣×Cpr）÷T= 18.52×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克樣品每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /g 鮮重）= 
×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T= 18.52×△A÷W
3．按照細(xì)胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /104 cell）= 
×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 18.52×△A÷細(xì)胞數(shù)量
4．按照液體體積計算
酶活性定義：每升培養(yǎng)液每分鐘氧化1nmol底物ABTS所需的酶量為一個酶活力單位。
漆酶活性（nmol/min /L）= 
×V反總÷V樣÷T= 18520×△A
ε：ABTS毫摩爾消光系數(shù)：36L/mmol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.3mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.045mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，20min
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資料/datasheet
