高鐵還原酶（ferric-chelate reductase, FCR）試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
高鐵還原酶（ferric-chelate reductase, FCR）催化高價鐵螯合物中的Fe3+還原為Fe2+，在部分物種鐵元素的吸收中有重要作用。
測定原理：
FCR催化Fe3+還原為Fe2+，F(xiàn)e2+和ferrozine反應(yīng)顯色，在562nm下有特征吸光值。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體6mL×1瓶，4℃避光保存;
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存;
試劑三：液體6mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?/strong>
按照組織質(zhì)量（g）：水（mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
FCR活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 8.0014x + 0.0011，R2 = 0.9997；
單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位。
FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷ 8.0014×1000×V標÷(V樣÷V樣總×W)÷T
= 4.166×（△A-0.0011）÷W
單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位。
FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷8.0014×1000×V標÷(V樣÷V樣總×Cpr)÷T
=4.166×（△A-0.0011）÷Cpr
V樣總：加入提取液體積，1 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，50μL；V標：加入標準品體積 ，50μL；T：反應(yīng)時間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；1000，μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù)。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 4.0007x + 0.0011，R2 = 0.9997；y，吸光度
單位定義：每g樣本每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位。
FCR（nmol/min/g 鮮重）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V標÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=8.331×（△A-0.0011）÷W
單位定義：每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmolFe2+-ferrozine定義為一個酶活力單位。
FCR（nmol/min/mg prot）=（△A-0.0011）÷4.0007×1000×V標÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=8.331×（△A-0.0011）÷Cpr
V樣總：加入提取液體積，1 mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，50μL；V標：加入標準品體積 ，50μL；T：反應(yīng)時間，30min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；1000，μmol到nmol的轉(zhuǎn)換系數(shù)。
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資料/datasheet
