線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm）試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義
ICDHm（EC 1.1.1.41）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸，同時將NAD+ 還原為NADH，是三羧酸循環(huán)的限速酶之一，其催化的反應是細胞NADH主要來源之一。
測定原理
ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH，導致340nm處光吸收上升。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：1.5mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，4℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存;
樣本的前處理：
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
測定步驟
（1）在試劑五中加入18mL試劑四充分溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（2）在試劑六中加入1mL蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑六和180μL試劑五，混勻，立即記錄340nm處20s時的吸光值A(chǔ)1和 2min20s后的吸光值A(chǔ)2，計算ΔA=A2-A1。
ICDHm活性計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=325×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.65×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應時間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=650×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個酶活性單位。
ICDHm活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=1.3×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應時間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
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資料/datasheet
