乳酸含量（lactic acid，LA）試劑盒說明書
微量法100T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義
乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。
測定原理
乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時(shí)使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體110mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體2mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入0.6mL蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加6mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：粉劑×1支，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體1mL×1支，4℃保存。
顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（mL)：0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有4個(gè)棕色空瓶）
樣本處理
測定操作
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樣品對照管 |
樣品測定管 |
標(biāo)準(zhǔn)對照管 |
標(biāo)準(zhǔn)測定管 |
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樣品（μL） |
10 |
10 |
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標(biāo)準(zhǔn)品（μL） |
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10 |
10 |
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H2O（μL） |
60 |
90 |
60 |
90 |
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試劑一（μL） |
30 |
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30 |
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試劑二（μL） |
40 |
40 |
40 |
40 |
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顯色液（μL） |
60 |
60 |
60 |
60 |
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充分混勻，于37℃反應(yīng)30min，于微量石英比色皿/96孔板，測定530nm處吸光值，分別記為A1，A2，A3，A4，△A樣=A2-A1；△A標(biāo)= A4-A3 |
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注意：標(biāo)準(zhǔn)對照管和標(biāo)準(zhǔn)測定管只需測定一次，每個(gè)樣品測定管設(shè)一個(gè)樣品對照管
計(jì)算公式
1. 按照蛋白含量計(jì)算
LA含量（μmol/mg prot）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ Cpr
= 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
LA含量（μmol/g 鮮重）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ W
= 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ W
LA含量（μmol/104 cell）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量
= 2×△A樣÷△A標(biāo)÷ 細(xì)胞數(shù)量
4. 按照液體體積計(jì)算
LA含量（μmol/mL）= △A樣÷△A標(biāo)×C標(biāo)
= 2×△A樣÷△A標(biāo)
C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，2mmol/L；W：樣本質(zhì)量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL
注意事項(xiàng)
若吸光值超過2，請進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯笤龠M(jìn)行測定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
最低檢出限為1.8μmol/L。
掃描二維碼
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資料/datasheet
