血糖含量試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
哺乳動物血液中的葡萄糖稱為血糖,是其體內(nèi)糖的主要運(yùn)輸形式。血糖濃度受神經(jīng)系統(tǒng)和激素的調(diào)節(jié)而保持相對穩(wěn)定,調(diào)節(jié)失衡時出現(xiàn)高血糖和低血糖。糖尿病、顱內(nèi)壓增加和脫水癥等均可引起高血糖;飯后,精神緊張也可出現(xiàn)生理性高血糖。相反,胰島β細(xì)胞增生或腫癌等,垂體、腎上腺皮質(zhì)和甲狀腺功能減退,以及嚴(yán)重肝病患者均可出現(xiàn)低血糖癥狀。此外,饑餓和劇烈運(yùn)動可引起暫時的低血糖。
測定原理:
葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產(chǎn)生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在505nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:0.5μmol/mL葡萄糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體 10ml×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體 10ml×1瓶,4℃保存;(若出現(xiàn)結(jié)冰現(xiàn)象,可37℃水浴溶解后使用)
測定步驟:
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至505nm,蒸餾水調(diào)零。
2、混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三1:1等體積混合,用多少配多少。
3、加樣表(在EP管或96孔板中加入下列試劑):
試劑(μL)
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空白管
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標(biāo)準(zhǔn)管
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測定管
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樣本
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20
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試劑一
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20
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蒸餾水
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20
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混合試劑
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180
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180
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180
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混勻,置37℃(哺乳動物)或25'C(其它物種)保溫15min后,于505nm波長處讀取吸光度。空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測定管吸光值分別記為A1、A2和A3??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
血糖含量計算:
血糖含量(μmol/mL)= C標(biāo)準(zhǔn)×(A3-A1)÷(A2-A1)=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)
C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.5μmol/mL。
注意:
1、最低檢測限為1nmol/mL。
2、若樣本中存在葡萄糖氧化酶抑制劑,則會造成測定結(jié)果偏低,建議改用HPLC法測定。