β-木糖苷酶（β- xylosidase）測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類半纖維素降解的關鍵酶，產物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè)，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保，具有廣泛的應用價值。
測定原理：
β-木糖苷酶催化對硝基苯酚-β-D-木糖苷產生對硝基苯酚，對硝基苯酚在405nm處有特征吸收峰，測定405nm光吸收增加速率，可計算β-木糖苷酶活性。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體1mL×1瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體10mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g，4℃，離心20min，取上清待測。
細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
液體：直接檢測。
測定操作表：
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對照管 |
測定管 |
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酶液（μL） |
40 |
40 |
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試劑一（μL） |
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10 |
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試劑二（μL） |
80 |
70 |
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混勻，45℃水浴20min |
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試劑三（μL） |
80 |
80 |
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混勻，靜置5min，405nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 |
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β-木糖苷酶活性計算公式：
標準曲線：y=13.226x+0.0011，R2=0.9998；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA。
1、按蛋白濃度計算
酶活定義：45℃，pH7.4時每毫克蛋白1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷（V樣×Cpr）÷T×1000
= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按樣本質量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4時每克樣品1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按細胞數(shù)量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4時每104個細胞1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數(shù)量（萬個）÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數(shù)量（萬個）
（4）按液體體積計算
酶活定義：45℃，pH7.4時每毫升液體1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷V樣÷T×1000
=11.34×(ΔA-0.0011)
V樣總：加入提取液體積，1mL； V反總：反應總體積，0.12mL；V樣：反應中樣品體積，0.04mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；T：反應時間，20min；1000:1μmol/L=1000nmol/L
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=6.613x+0.0011，R2=0.9998；x為標準品濃度（μmol/mL），y為吸光值ΔA
1、按蛋白濃度計算
酶活定義：45℃，pH7.4時每毫克蛋白1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mg prot）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷（V樣×Cpr）÷T×1000
= 22.68×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按樣本質量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4時每克樣品1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷（V樣÷V樣總×W）÷T×1000= 22.68×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按細胞數(shù)量計算：
酶活定義：45℃，pH7.4時每104個細胞1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/104cell）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷V樣×V樣總÷細胞數(shù)量（萬個）÷T×1000=22.68×(ΔA-0.0011) ÷ 細胞數(shù)量（萬個）
（4）按液體體積計算
酶活定義：45℃，pH7.4時每毫升液體1min內催化產生1 nmol對硝基苯酚為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷V樣÷T×1000
=22.68×(ΔA-0.0011)
V樣總：加入提取液體積，1mL； V反總：反應總體積，0.12mL；V樣：反應中樣品體積，0.04mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；T：反應時間，20min；1000:1μmol/mL=1000nmol/mL
ΔA控制在0.01-1范圍內，若ΔA大于1，可適當減小樣本量。
標準曲線線性范圍為：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
掃描二維碼
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資料/datasheet
