酸性木聚糖酶（Acidic Xylanase，ACX）測定試劑盒說明書
微量法100T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)中，ACX一般分離自耐酸的真菌，細菌及部分霉菌。
測定原理：
ACX在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進一步在沸水浴條件下與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算ACX活力。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體90mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。（若出現白色絮狀或顆粒狀沉淀，可60℃加熱溶解后使用）。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶提?。?/p>
測定操作表：
2、操作表
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對照管 |
測定管 |
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樣品（μL） |
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60 |
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滅活的樣品（μL） （95℃水浴15min） |
60 |
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緩沖液（μL） |
90 |
90 |
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試劑一（μL） |
60 |
60 |
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混勻，50℃水浴中反應30min，立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應體系) |
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試劑二（μL） |
90 |
90 |
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混勻，沸水浴顯色5min，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中540nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 |
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ACX計算公式：
標準曲線：y = 2.5554x - 0.002 ，R2 = 0.9983
1. 按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/mL）= （ΔA+0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數×106
= 435× (ΔA+0.002)
2. 按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr
= 435×(ΔA +0.002 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數×106÷W
= 435×(ΔA +0.002 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數=V反總÷V樣=300μL÷60μL=5；
106：轉化因子，即1mg/mL=106ng/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.2777x - 0.002 ，R2 = 0.9983
1. 按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/mL）= （ΔA+0.002）÷1.2777÷150÷T×稀釋倍數×106
= 869.6× (ΔA+0.002)
2. 按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.002）÷1.2777÷150÷T×稀釋倍數×106÷Cpr
= 869.6×(ΔA +0.002 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA +0.002）÷1.2777÷150÷T×稀釋倍數×106÷W
= 869.6×(ΔA +0.002 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數=V反總÷V樣=300μL÷60μL=5；
106：轉化因子，即1mg/mL=106ng/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。
注意事項
1. 吸光度變化應該控制在0.01～0.8之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數要相應改變。
2. 試劑盒2-8℃保存，保質期3個月，建議盡快使用。
掃描二維碼
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資料/datasheet
