半纖維素（hemicellulose）含量試劑盒說明書
微量法 100管/96樣
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
半纖維素是植物細(xì)胞壁中與纖維素緊密結(jié)合的多糖混合物，是構(gòu)成細(xì)胞初生壁的主要成分，廣泛存在于植物中，是一種新型可利用能源。
測(cè)定原理
半纖維素經(jīng)酸處理后轉(zhuǎn)化成還原糖，與DNS生成紅棕色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰，吸光值大反映了半纖維素含量。
需自備的儀器和用品、
天平、40目篩，恒溫水浴鍋、烘箱、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板
試劑組成和配制
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑四：液體5mL×1瓶，4℃避光保存。
樣品處理
樣品80℃烘干至恒重，粉碎，過40目篩。
測(cè)定操作表
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空白管 |
測(cè)定管 |
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樣本（g） |
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0.02 |
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試劑一（μL） |
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1000 |
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90℃水浴10min，25℃，8000g離心10min，棄上清 |
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蒸餾水（μL） |
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1000 |
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充分混勻，25℃，8000g離心10min，此步驟重復(fù)3次，取沉淀105℃，烘干至恒重 |
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試劑二（μL） |
200 |
200 |
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90℃水浴1h，自然冷卻 |
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試劑三（μL） |
200 |
200 |
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混勻，25℃，8000g離心10min |
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上清（μL） |
60 |
60 |
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試劑四（μL） |
45 |
45 |
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蒸餾水（μL） |
195 |
195 |
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充分混勻，90℃水浴5min，自然冷卻，25℃，8000g離心10min |
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取200μL上清液于微量石英比色皿/96孔板，測(cè)定540nm處吸光值A(chǔ)。分別記為A空白管和A測(cè)定管，ΔA=A測(cè)定管-A空白管?？瞻坠苤灰鲆还堋?/p> |
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計(jì)算公式
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.3968x+0.0306，R2=0.9961；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、半纖維素含量（mg/g 干重）=（△A-0.0306）÷ 0.3968÷（W÷V樣總）
= 1.01×（△A-0.0306）÷W
b．用96孔板計(jì)算公式如下：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.1984x+0.0306，R2=0.9961；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、半纖維素含量（mg/g 干重）=（△A-0.0306）÷ 0.1984÷（W÷V樣總）
= 2.02×（△A-0.0306）÷W
W：樣品質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體，0.4mL。
檢測(cè)限為1mg/g。
掃描二維碼
掃描二維碼 撫生公眾號(hào) |
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資料/datasheet