山梨醇含量試劑盒說(shuō)明書
微量法 100管/96樣
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
山梨醇廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是糖運(yùn)輸形式之一，而且與生物抗逆性和食物風(fēng)味密切相關(guān)。因此，在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測(cè)山梨醇含量變化。
測(cè)定原理：
山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍(lán)色絡(luò)合物，在655nm波長(zhǎng)有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體3.5mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：液體3.5mL×1瓶 ，4℃保存。
山梨醇的提?。?/p>
按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴10分鐘（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心10min，取上清液待測(cè)。
測(cè)定步驟
2、加樣表（在EP管中依次加入下列試劑）：
|
試劑（μL） |
空白管 |
測(cè)定管 |
|
試劑一 |
35 |
35 |
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試劑二 |
35 |
35 |
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樣本 |
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230 |
|
蒸餾水 |
230 |
|
混勻后室溫靜置15min，8000g，25℃離心10min，取200μL上清液至微量石英比色皿或96孔板中，測(cè)655nm下吸光值A(chǔ)，計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A空白管?？瞻坠苤灰鲆还堋?/p>
山梨醇含量計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.352x - 0.002；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算
山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷W
3、按照樣本蛋白濃度計(jì)算
山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr
V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.176x - 0.002；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸光值。
2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算
山梨醇含量（mg /g 鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(W×V1÷V2)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W
3、按照樣本蛋白濃度計(jì)算
山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.176×V1]÷(V1×Cpr)=5.68×(ΔA＋0.002) ÷Cpr
V1：加入樣本體積，0.23mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g
注意：最低檢測(cè)限為1μg/g鮮重或0.01μg /mg prot
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