β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase, β-GC）試劑盒說明書
微量法 100管/48樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
β-GC（EC 3.2.1.21）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化β-糖苷鍵水解，具有多方面生理作用：在纖維素的糖化作用中，β-GC負責(zé)進一步水解纖維素二糖和纖維素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯類香氣前驅(qū)體，使糖苷鍵合態(tài)變成游離態(tài)。從而產(chǎn)生香味；β-GC能夠水解植物體內(nèi)野黑櫻苷，釋放HCN，從而防止昆蟲取食。
測定原理：
β-GC分解對-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GC活性。
自備用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入12mL蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3、培養(yǎng)液、血清（漿）等液體樣本：直接檢測。
測定步驟
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試劑名稱（μL） |
測定管 |
對照管 |
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試劑一 |
120 |
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蒸餾水 |
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120 |
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試劑二 |
150 |
150 |
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樣本 |
30 |
30 |
充分混勻，放入37℃準確水浴30min后，立即放入95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變），8000g，4℃，離心5min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑）
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上清液 |
70 |
70 |
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試劑三 |
130 |
130 |
充分混勻，室溫靜置2min后， 400nm處測定吸光值A(chǔ)，計算ΔA=A測定管-A對照管。
每個測定管需設(shè)一個對照管。
β-GC活力計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
（1）按液體體積計算：
單位的定義：每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷V樣÷T
=56.98×(ΔA+0.0027)
（2）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（3）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=56.98×(ΔA+0.0027) ÷W
（4）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.114×(ΔA +0.0027)
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；T：反應(yīng)時間，30min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027；x為標準品濃度（nmol/mL），y為吸光值。
（1）按液體體積計算：
單位的定義：每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷V樣÷T
=85.47×(ΔA+0.0027)
（2）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
（3）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=85.47×(ΔA+0.0027) ÷W
（4）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活性單位。
β-GC活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.171×(ΔA +0.0027)
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g； 500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；T：反應(yīng)時間，30min。
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資料/datasheet
